浙江七葉一枝花資源調(diào)查及遺傳多樣性分析.pdf

1、重樓為我國特有名貴藥材,以根莖入藥,具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚、抗癌止血、祛痰抑菌、止咳平喘、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抗細胞毒等多種功效而成為許多著名中成藥的主要原料,擁有廣闊的開發(fā)應用前景。七葉一枝花是《中國藥典》所記載重樓藥材的基源植物之一,由于其生存環(huán)境的惡化及人為過度采挖致,野生資源正逐漸減少,在一些地方已處于瀕危的境地。本研究通過對浙江野生七葉一枝花資源的系統(tǒng)調(diào)查、收集及遺傳多樣性研究,了解其資源在浙江的分布、生存及遺傳多樣性狀況,建

2、立七葉一枝花的種質(zhì)資源圃,為其資源的引種馴化、種質(zhì)篩選、合理利用和有效保護奠定良好基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:
　　1.對浙江省境內(nèi)臨安、磐安、開化、景寧等9個代表性地區(qū)的七葉一枝花野生種質(zhì)資源進行實地調(diào)查,共采集到野生種質(zhì)資源124份。調(diào)查發(fā)現(xiàn)其野生資源雖然分布較廣,但數(shù)量稀少,大多零散分布于海拔500—1500m,年平均溫16℃,年降水量1400-2000mm的區(qū)域內(nèi),生長在常綠闊葉林、竹林、雜木林、灌木叢下、林下溪邊、陰坡林緣等濕潤

3、且蔭蔽度較大的地帶,其伴生植物常有杉木、黃精、烏藥、淡竹葉、棕櫚、苦竹、益母草、天南星、苧麻、過路黃、海星沙、魚腥草等。
　　2.通過對8個種源地48份野生七葉一枝花種質(zhì)16個形態(tài)學性狀的調(diào)查分析,發(fā)現(xiàn)各性狀在不同種源地間和同一種源地不同個體間均存在一定程度的差異,不同性狀之間的變異程度也各不相同,它們的平均變異系數(shù)在12.98％~42.64%之間,性狀變異系數(shù)從大到小的排序為:花梗長>葉柄長>花瓣寬>株高>莖粗>花瓣長>葉寬>花

4、萼寬>葉長>冠幅>花瓣數(shù)>花萼數(shù)>雄蕊數(shù)>花萼長>莖數(shù)>葉片數(shù)。8個種源地形態(tài)性狀的總體平均變異系數(shù)也存在差異,從大到小的排序為:FH>JN>KH>SC>LS>TS>LQ>PA。主成成分分析結(jié)果顯示:營養(yǎng)器官和生殖器官均存在較大差異,鑒于營養(yǎng)器官各性狀易受生態(tài)環(huán)境的影響,七葉一枝花生殖器官各性狀的變異更能穩(wěn)定的遺傳?；谄呷~一枝花形態(tài)學性狀的 UPGMA聚類分析顯示,48份種質(zhì)可聚為3類,開化、磐安、泰順的種源地種質(zhì)聚為第一類,景寧、遂

5、昌及臨安順溪種源地的種質(zhì)聚為第二類,臨安清涼峰及奉化種源地的種質(zhì)聚為第三類。
　　3.建立了七葉一枝花 ISSR-PCR最佳反應體系,即:25μL反應體系中,dNTPs0.2mmol/L,TaqDNA聚合酶0.75U,引物0.6μmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,模板40ng。反應擴增程序為:95℃預變性5min;94℃變性40s;52℃退火45s;72℃延伸90s;40次循環(huán);72℃延伸7min。
　　4.利用篩選

6、到的13條ISSR引物,對48份七葉一枝花種質(zhì)進行擴增,共擴增到90個條帶,其中多態(tài)性條帶為79條,多態(tài)性帶比率為87.78%。8個種源地的多態(tài)性條帶數(shù)和多態(tài)性比率分別在26-46和28.89%-51.11%之間,多態(tài)性比率最高和最低的分別為臨安順溪群體和磐安源頭村群體;8個種源地Nei基因多樣度指數(shù)(H)在0.1133-0.2193之間,Shannon指數(shù)(I)在0.1654-0.3152之間,種源Nei基因多樣度指數(shù)(H)和Shan

7、non指數(shù)(I)分別為0.2974和0.4475,說明了七葉一枝花具有較高的遺傳多樣性,各種源地的遺傳多樣性水平高低依次為 LQ>JN>LS>KH>FH>SC>TS>PA。根據(jù)種源地間遺傳分化系數(shù)Gst為0.4422,可以得出種源的遺傳多樣性發(fā)生在同一種源地群體內(nèi)和不同種源地群體間的變異大體相當。在遺傳相似系數(shù)的基礎(chǔ)上,利用UPGMA法建立了浙江七葉一枝花種質(zhì)分子水平聚類圖,可將48份種質(zhì)資源分為兩大類,第一類為來源于臨安順溪與清涼峰種