煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉的抗性風(fēng)險(xiǎn)研究.pdf

1、本研究從山東、云南和貴州煙區(qū)采集分離了40個(gè)煙草黑脛病菌(Phytophthora parasitica var,．nicotianae)菌株，采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定了烯酰嗎啉對(duì)這些菌株的毒力。以山東農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草研究室長(zhǎng)期保存、采集于從未使用過化學(xué)藥劑的煙草種植區(qū)的菌株S為對(duì)照，比較了40個(gè)菌株與敏感菌株之間的敏感性差異。并從采集的菌株中篩選出一株對(duì)烯酰嗎啉敏感且生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、產(chǎn)孢量大的菌株(ZC001)為供試親本敏感菌株，室內(nèi)經(jīng)藥劑篩選和紫外

2、光照射誘導(dǎo)，分別獲得了抗烯酰嗎啉黑脛病菌菌株(KX1，KX2)，另選出一株對(duì)烯酰嗎啉不敏感的菌株作為田間抗性菌株。研究了煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉的抗性發(fā)展規(guī)律；測(cè)定了抗性菌系對(duì)幾種常用藥劑的交互抗性。研究了不同抗性菌株在生長(zhǎng)速率、菌絲干重、致病性等方面的生物學(xué)差異；采用菌落直徑法和菌絲干重法研究了不同pH值、溫度和光照對(duì)抗性和敏感菌株生長(zhǎng)的影響，以探明抗性菌株和敏感菌株之間生理適合度的差異，并對(duì)抗烯酰嗎啉菌系的抗性機(jī)理進(jìn)行了初步的探討，在

3、此基礎(chǔ)上評(píng)價(jià)煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉的抗性風(fēng)險(xiǎn)性。結(jié)果說(shuō)明： 1、40個(gè)田間菌株的EC<,50>值范圍在0.3376～9.5594μg/mL之間，與實(shí)驗(yàn)室保存的敏感菌株(S)的EC<,50>值0.32151μg/mL相比，抗性倍數(shù)在1.05～29.73之間，有27個(gè)菌株的ECso值小于1.3μg/mL，抗性倍數(shù)均小于4，屬于敏感菌株；7個(gè)菌株的抗性倍數(shù)大于5小于20，屬于中抗菌株；6個(gè)菌株的抗性倍數(shù)大于20，屬于高抗菌株。在保存過

4、程中發(fā)現(xiàn)田間抗性菌株的EC<,50>值略有降低。烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌孢子囊的產(chǎn)生有明顯的抑制作用，81μg/mL的烯酰嗎啉對(duì)孢子囊產(chǎn)生的抑制率為100％。通過烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌繼代培養(yǎng)物的毒力比較證明，煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉存在抗性風(fēng)險(xiǎn)。 2、通過采用藥劑誘導(dǎo)和紫外光照射誘導(dǎo)的方法，分別獲得抗性菌株KX1和KX2，KX1對(duì)烯酰嗎啉的ECso值為8.7024μg/mL，與敏感菌株ZC001比較，抗倍數(shù)性為25.78：UV誘導(dǎo)

5、獲得的抗性菌株KX2的EC<,50>值為3.9923μH/mL，抗性倍數(shù)為11.8；田間選擇的抗性菌株FX001的EC<,50>值為9.5594μg/mL，抗性倍數(shù)達(dá)29.73。通過對(duì)各抗性菌系進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)各菌系在無(wú)藥培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)代培養(yǎng)8代以后，抗性菌系KX1、KX2和田間自然抗性菌株FX001的生長(zhǎng)速率與ZC001差異不明顯，KX1和KX2的抗性波動(dòng)范圍也很小，穩(wěn)定性較強(qiáng)，而FX001的EC<,50>值有降低趨勢(shì)。

6、3、用實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)獲得的抗性菌株KX1和KX2進(jìn)行交互抗藥性試驗(yàn)表明，烯酰嗎啉和甲霜靈、代森錳鋅、百菌清、霜脲氰、乙磷鋁和霜霉威6種藥劑之間無(wú)交互抗性。烯酰嗎啉、甲霜靈、代森錳鋅、百菌清、霜脲氰和乙磷鋁的對(duì)ZC001的EC<,50>值分別為0.33761μg/mL、0.18771μg/mL、1.988μg/mL、7.6061μg/mL、18.108μg/mL和91.733μg/mL，其中甲霜靈對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng)，烯酰嗎啉次之，百菌清

7、、霜脲氰和乙磷鋁對(duì)煙草黑脛病菌也有較強(qiáng)的抑制作用，都是防治煙草黑脛病的有效藥劑；霜霉威對(duì)煙草黑脛病菌的菌絲生長(zhǎng)抑制作用低，EC<,50>值僅為2728.3ktg/mL，這與其實(shí)際防治效果不符，其原因在于該藥劑在植物體內(nèi)經(jīng)活化后才具有抑菌活性。FX001菌株保存一定時(shí)間后，對(duì)烯酰嗎啉的EC<,50>值下降至6.0246μg/mL，比剛采回時(shí)的9.5594μg/mL下降58.67％。 4、以獲得的抗性菌株和敏感菌株為材料，研究了抗性

8、菌株和敏感菌株之間生理適合度的差異。發(fā)現(xiàn)敏感菌系的菌絲生長(zhǎng)速率、菌絲干重均大于抗性菌系，且抗性菌系產(chǎn)生大量氣生菌絲；田間抗性菌株FX001的致病力最強(qiáng)，敏感菌株ZC001次之，KX2的致病力最差。所有供試菌株在pH值6、7、8、9時(shí)生長(zhǎng)均較快，在pH值為4和11時(shí)，抗性菌株的生長(zhǎng)速度略高于敏感菌株。所有菌株均是在28℃生長(zhǎng)速度最快，在24℃和32℃時(shí)，抗性菌株的生長(zhǎng)速度略高于敏感菌株；在相同的溫度條件下，ZC001和FX001的菌落直徑

9、要明顯高于KX1和KX2，但KX1、KX2之間的菌落直徑差異不明顯。抗性菌株和敏感菌株在不同光照條件下差異不明顯。 5、不同濃度烯酰嗎啉處理后的抗性與敏感菌株，體內(nèi)苯丙氨酸解氨酶(PAL)和過氧化物酶(POD)的活性隨時(shí)間而變化，且活性與抗藥性呈一定的相關(guān)性。用藥劑處理后PAL活性表現(xiàn)出先迅速上升又迅速下降的趨勢(shì)，以25μg/mL處理6h時(shí)FX001活性最高，達(dá)604U/g.h；KX1、KX2和ZC001的PAL活性值也分別為5

10、98、564和504U/g.h；此后所有處理的PAL活性隨著時(shí)間迅速下降。用烯酰嗎啉處理所有菌株，24h．內(nèi)所有菌株的POD活性不斷升高，抗性菌株的POD活性明顯高于敏感菌株，其中KX1．的活性最高；至24h，用25μg/mL烯酰嗎啉處理后KX1、KX2、FX001和ZC001的POD活性分別為42.98、23.61、29.98和19.64U/g-min，均達(dá)最高值。酯酶同工酶和可溶性蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗性菌株和敏感菌株