瘢痕疙瘩miRNA表達(dá)譜的篩選及miR-199A-5p對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖功能的影響.pdf

1、目的:
　　隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，許多研究表明瘢痕疙瘩的形成可能與基因的結(jié)構(gòu)、功能或表達(dá)異常有關(guān)，但具體的調(diào)控機(jī)制尚不明確。miRNA是真核細(xì)胞中一類長度約為22個核苷酸的參與基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的非編碼小分子RNA。它參與了細(xì)胞增殖、分化、凋亡、免疫反應(yīng)等一系列重要生物進(jìn)程的調(diào)節(jié)，與多種疾病的發(fā)生密切相關(guān)。本研究旨在篩選出瘢痕疙瘩相關(guān)miRNAs，初步構(gòu)建瘢痕疙瘩miRNA差異表達(dá)譜，并檢測miRNA對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)

2、胞增殖的影響，為瘢痕疙瘩在miRNA分子水平的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從而指導(dǎo)瘢痕疙瘩的有效治療。
　　方法:
　　收集手術(shù)切除瘢痕疙瘩組織（8例）及正常皮膚組織（8例）標(biāo)本，采用miRNA基因芯片（Exiqon公司）技術(shù)檢測瘢痕疙瘩與正常皮膚組織差異表達(dá)的miRNA基因，選擇顯著差異表達(dá)的目的miRNA: miR-199a-5p，運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證其表達(dá)，并于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染miR-199a-

3、5p模擬物(miR-199a-5p mimics)，模擬細(xì)胞中成熟miR-199a-5p的高表達(dá)，使用EdU檢測方法檢測其對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖功能的影響。
　　結(jié)果:
　　1.通過芯片檢測及聚類分析，共發(fā)現(xiàn)17個明顯與正常皮膚組織表達(dá)差異的miRNAs: hsa-miR-516b、hsa-miRPlus-E1106、hsa-miRPlus-E1247表達(dá)上調(diào);hsa-miR-214、hsa-miR-645、hsa-miR

4、-338-5p、hsa-miR-934、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-21*、hsa-miR-122*、hsa-miR-186*、hsa-miR-495、hsa-miR-412、hsa-miR-551b*、hsa-miRPlus-F1158、hsa-miRPlus-E1038、hsa-miR-1038表達(dá)下調(diào)。
　　2.qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示miR-199a-5p表達(dá)下調(diào)，與芯片檢測結(jié)果相一致。
　　3

5、.EdU檢測結(jié)果顯示:與NC轉(zhuǎn)染組相比，miR-199a-5p mimics轉(zhuǎn)染組瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖率下降，細(xì)胞的生長周期分布發(fā)生改變，S期及G2/M期比例增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.瘢痕疙瘩中miRNA的差異表達(dá)有組織特異性:與正常皮膚組織相比，瘢痕疙瘩組織中共168個miRNA表達(dá)上調(diào)，125個miRNA下調(diào)表達(dá)。綜合應(yīng)用聚類及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果顯示明顯上調(diào)的miRNA3個，下調(diào)的為14個。