提高大鼠脂肪間充質干細胞轉化為胰島樣細胞能力的實驗研究.pdf

1、目的：（1）大鼠脂肪間充質干細胞的分離、提取和培養(yǎng)。（2）探討損傷胰腺提取液和細胞生長因子對脂肪間充質干細胞分化為胰島樣細胞的影響。
　　方法：（1）無菌條件下通過手術獲取大鼠脂肪組織，用膠原酶消化法獲取脂肪間充質干細胞，并通過胰蛋白酶消化法傳代細胞以達到純化的目的。（2）按對照組、藥物誘導組、混合誘導組和損傷胰腺提取液組的順序進行分組，各組加入不同的細胞誘導因子和損傷胰腺提取液對細胞進行誘導11d，誘導完畢后，于倒置顯微鏡下觀察

2、細胞形態(tài)變化；用雙硫腙(STZ)染色鑒定胰島素陽性細胞；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)來比較高糖環(huán)境刺激前后各組胰島素分泌量的多少；通過免疫熒光染色和熒光定量-聚合酶鏈反應(RT-PCR)來檢測相關基因的表達量。
　　結果：（1）獲取的大鼠脂肪間充質干細胞貼壁生長，原代細胞呈圓形；36-48h開始有梭形細胞貼壁或者成團的細胞集落形成；7-8天左右，原來成團聚集的細胞向外擴散生長，細胞之間的間隙逐漸縮小并相互融合，呈現(xiàn)旋渦狀生長。

3、約10天左右，瓶底細胞達到80％-90%融合。經過消化傳代，細胞的純度逐漸增高。（2）誘導組細胞形狀變?yōu)閳A形并聚集成團，出現(xiàn)DTZ染色陽性細胞；在高糖環(huán)境作用下分泌胰島素且混合誘導組相比較于其余誘導組分泌量多；混合誘導組相關基因的表達量多于其余兩組。對照組未出現(xiàn)上述變化。
　　結論：（1）膠原酶消化法能夠分離出大鼠脂肪間充質干細胞，通過胰蛋白酶消化法可以實現(xiàn)細胞的純化。（2）損傷胰腺提取液對大鼠脂肪間充質干細胞分化為胰島樣細胞具有