農(nóng)抗9512-3高產(chǎn)菌株的選育.pdf

1、農(nóng)抗9512-3是一種新型大環(huán)內(nèi)酯類類化合物，是一種高效、低毒、廣譜的殺蟲抗生素，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有良好的應(yīng)用，具有廣闊的市場(chǎng)前景。本試驗(yàn)對(duì)9512-3生產(chǎn)菌株進(jìn)行了一系列的物理化學(xué)誘變并建立了原生質(zhì)體制備、融合及再生的最佳條件，在此基礎(chǔ)上應(yīng)用基因組重排技術(shù)，展開了對(duì)農(nóng)抗9512-3的高產(chǎn)菌種育種工作。
　　 通過對(duì)原始菌株進(jìn)行分離復(fù)壯，獲得一株遺傳性能較為穩(wěn)定的出發(fā)菌株Dor-90（效價(jià)204.9ug/ml），經(jīng)過一系列誘變獲得

2、菌株UL-33（高產(chǎn)菌株，效價(jià)313.2ug/ml）和D7（長勢(shì)良好但效價(jià)很低），并通過硫酸鏈霉素和慶大霉素抗性平板篩選，得到了Y34（Str+Gen－）菌株和Z18（Str－Gen+）菌株。
　　 以UL-33為出發(fā)菌株進(jìn)行原生質(zhì)體制備條件探索，試驗(yàn)結(jié)果顯示菌株UL-33原生質(zhì)體制備的最佳條件為250ml三角瓶裝有30 ml含0.5％甘氨酸的YEME培養(yǎng)基，孢子懸液接種，28℃，200r/min培養(yǎng)42h；3000r/min收

3、集菌絲體，并用濃度為10.3％蔗糖溶液清洗2次；在溶菌酶濃度為3mg/ml的P緩沖液懸浮菌絲體，30℃下酶解60min，原生質(zhì)體制備完成。原生質(zhì)體在PEG1000濃度為40％時(shí)，融合率最高。
　　 以Y34（Str+Gen－）、z18（Str－Gen+）、D7（長勢(shì)良好但效價(jià)很低）和AA732（實(shí)驗(yàn)室原始保存菌株）為親本進(jìn)行基因組重排育種研究，結(jié)果顯示隨著重排的深入，重組群體中高產(chǎn)菌株的出現(xiàn)頻率增加。通過連續(xù)五輪基因重排，融合效