多發(fā)性肌炎-皮肌炎外周血單個核細(xì)胞microRNA表達譜分析.pdf

1、目的:
　　(1)篩選并驗證與多發(fā)性肌炎(polymyositis，PM)和皮肌炎(dermatomyositis，DM)相關(guān)的外周血microRNA(miRNA)標(biāo)志物。
　　(2)分析PM/DM患者血清中肌炎相關(guān)抗體(myositis associated antibodies，MAAs)和肌炎特異性抗體(myositisspecific antibodies，MSAs)的陽性率以及與臨床的相關(guān)性。
　　(3)探索

2、PM/DM患者住院死亡相關(guān)危險因素。
　　方法:
　　(1)通過miRNA表達譜芯片篩選未經(jīng)治療的PM/DM患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)中差異性表達的miRNA。通過文獻檢索及生物信息學(xué)分析，對差異表達的miRNA進行進行靶基因預(yù)測及信號通路分析，挑選出與PM/DM發(fā)病相關(guān)的miRNA進行擴大樣本的real-time PCR驗證，并分析其表達水平與臨床

3、特征及實驗室指標(biāo)的相關(guān)性。應(yīng)用real-time PCR方法探索差異表達miRNA的靶基因在PBMC中的表達水平。
　　(2)回顧性收集北京協(xié)和醫(yī)院診治的PM/DM患者228例，收集患者住院及門診病案記錄的臨床資料及血清MAAs、 MSAs檢測結(jié)果。分析每種MAAs和MSAs的陽性率，并將患者根據(jù)每種抗體分為抗體陽性組和陰性組，比較兩組間臨床資料的差異，分析抗體和臨床的相關(guān)性。
　　(3)回顧性分析北京協(xié)和醫(yī)院住院死亡的45

4、例PM/DM患者，以90例存活患者作為對照，收集兩組患者的住院病歷資料，進行二元logistic回歸篩選和住院死亡相關(guān)的危險因素。
　　結(jié)果:
　　(1)對6例未經(jīng)治療的PM/DM患者及3例健康對照(health controls，HC)的PBMC進行miRNA芯片檢測，篩選出38條異性表達的miRNA，其中24條表達上調(diào)，14條表達下調(diào)。結(jié)合miRNA差異表達倍數(shù)、表達豐度，通過文獻檢索和生物信息學(xué)分析，挑選出hsa-mi

5、R-320a、hsa-miR-335-3p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-454-3p進行進一步驗證。通過34例PM/DM患者及20例HC的real-time PCR證實hsa-miR-34a-5p在PM/DM組PBMC中較HC組表達顯著上調(diào)，相對表達量(relativequantity, RQ)為3.20(1.87,9.24)vs.1.68±0.91, P=0.001。 hsa-miR-320a、hsa-miR-335

6、-3p、hsa-miR-454-3p在兩組間表達水平無顯著差異。亞組分析中，hsa-miR-34a-5p的表達水平在DM組、肺間質(zhì)病變(interstitial lung disease，ILD)組和DM-ILD組表達較PM組、無肺間質(zhì)病變(non-ILD)組、DM-nonILD組顯著上調(diào)，RQ值分別為4.81(2.39，10.92) vs.1.45±0.89，P=0.001;5.85(2.66，13.22)vs.1.94(1.36,3

7、.13),P=0.001;6.32(3.11,13.32) vs.3.66±2.88,P=0.012。 Real-timePCR驗證hsa-miR-34a-5p的靶基因SIRT1在PBMC中的表達量，PM/DM組較HC組顯著下調(diào)（RQ值0.73±0.37 vs.1.23±0.38，P＜0.001）。
　　(2)PM/DM患者血清中存在多種自身抗體，MAAs中抗Jo-1抗體陽性率為13％(30/224)，抗Jo-1抗體陽性組出現(xiàn)發(fā)熱

8、、技工手、ILD的比例顯著高于陰性組（分別為57％vs.37％，37％vs.20％，93％vs.66％，P＜0.05）。抗Mi-2抗體在DM中陽性率為7.2％(5/69)，抗SRP抗體、抗PL-7抗體和抗PL-12抗體在PM/DM中陽性率分別為7.5％(4/53)、2.2％(2/91)、2.2％(2/91)，54例患者中未發(fā)現(xiàn)抗EJ抗體或抗OJ抗體陽性者。MAAs中抗Ro52抗體陽性率為48％(85/177)，抗體陽性組發(fā)生Gottro

9、n征、發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛/關(guān)節(jié)炎、ILD的比例顯著高于陰性組（分別為58％vs.41％，50％vs.27％，49％vs.29％，88％vs.54％，P＜0.05）?？筍SA抗體、抗PM-Scl抗體和抗Ku抗體陽性率分別為14％(31/215)、2.4％(4/169)、1.1％(1/91)。抗SSB抗體(1.9％，4/214)、抗RNP抗體(2.3％，5/215)、AMA-M2(4.8％，8/166)均與心臟受累相關(guān)，抗體陽性組發(fā)生心肌受累或心

10、率失常的比例顯著高于抗體陰性組(50％vs.7.2％，40％vs.4.8％，50％vs.3.8％，P＜0.05)。此外抗RNP抗體還和肺動脈高壓相關(guān)，抗體陽性組發(fā)生肺動脈高壓的比例顯著高于抗體陰性組(60％vs.7.6％，P=0.001)。
　　(3) PM/DM患者住院死亡的主要死因為肺部感染(44％)、ILD進展(18％)、ILD進展合并肺部感染(20％)，通過二元logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)肺部感染(0R187.2，95％C

11、I25.8-1356.4，P＜0.001)、心肌受累（0R35.0，95％CI1.2-1054.9，P=0.041）、Gottron征（0R13.2,95％CI2.6-67.0,P=0.002）、ESR增快(0R9.9,95％CI2.0-49.0,P=0.005)是PM/DM患者住院死亡的獨立危險因素。
　　結(jié)論:
　　(1) PM/DM患者PBMC中存在差異性表達的miRNA，其中hsa-miR-34a-5p表達顯著上調(diào)且