福建省楊梅不同品種的RAPD分析.pdf

1、本研究以福建省的30份楊梅品種為材料,摸索出適合楊梅葉片基因組DNA的提取方法；建立并優(yōu)化了楊梅RAPD反應(yīng)體系和擴(kuò)增反應(yīng)的程序；采用RAPD標(biāo)記結(jié)合聚類分析,進(jìn)行了福建省楊梅不同品種的親緣關(guān)系與遺傳多樣性研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.楊梅葉片DNA提取方法的建立針對楊梅葉片富含多糖、多酚類、色素等物質(zhì)的特點(diǎn),采用改良的CTAB法來提取楊梅基因組DNA。首先,以新鮮幼嫩的楊梅葉片為材料,在提取DNA之前先進(jìn)行預(yù)磨樣,有效地

2、解決了提取DNA時(shí)樣品處理時(shí)間長短不一、同一批次DNA質(zhì)量和產(chǎn)率相差較大等問題,這是提取高質(zhì)量楊梅基因組DNA的關(guān)鍵技術(shù)之一。其次,在細(xì)胞核被裂解之前,加入DNA提取洗凈液先除糖,能有效地消除糖類物質(zhì)的干擾。再次,在提取液中加入2％的PVP和β-巰基乙醇,有效地抑制了多酚類物質(zhì)和其它物質(zhì)的氧化。從而提取了較高純度和產(chǎn)量的DNA,適宜作為楊梅品種的RAPD分析。
　　 2.楊梅RAPD反應(yīng)體系的優(yōu)化在參考一般RAPD分析的反應(yīng)程序

3、的基礎(chǔ)上,經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)確定適宜的PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s；37℃退火30s；72℃延伸90s,38個(gè)循環(huán)；最后一次72℃延伸7min。優(yōu)化的楊梅RAPD反應(yīng)體系為:在20μL擴(kuò)增反應(yīng)總體積中,包含2.0μL10×Buffer緩沖液、2.5mmol／L MgCl2、0.25mmol／L dNTPs、1.5μmol／L引物、40ng模板DNA和1.0U Taq DNA聚合酶。
　　 3.楊梅RAPD標(biāo)

4、記的多態(tài)性程度分析從171個(gè)RAPD隨機(jī)引物中篩選出14個(gè)具特異擴(kuò)增的多態(tài)性引物,對福建省30份楊梅基因型進(jìn)行擴(kuò)增,共擴(kuò)增出155條RAPD標(biāo)記條帶,其中多態(tài)性帶130條,多態(tài)性百分率為83.8％,平均每個(gè)引物檢測到的條帶數(shù)為9.3條。
　　 4.楊梅品種RAPD標(biāo)記的聚類分析 RAPD標(biāo)記的福建省30份楊梅品種兩兩之間的遺傳相似系數(shù)均在0—1之間。王子安海與早生安海之間的的遺傳相似系數(shù)最大,而桐子楊梅與晚稻楊梅的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。