傷寒Vi結(jié)合疫苗免疫小鼠后的抗體類型及動態(tài)趨勢.pdf

1、目的：實驗中用傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗與Vi多糖抗原分別免疫小鼠，摸索最佳免疫劑量、分析免疫后不同時間點血清中特異性IgA、IgM、IgG及其亞類(IgG1、IgG2a、IgG3)的滴度變化，以及用小鼠脾臟制成的淋巴細(xì)胞懸液中CD<'4+>、CD8<'+>T細(xì)胞的數(shù)量變化，為傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗的臨床評估和今后應(yīng)用提供免疫學(xué)依據(jù)。 方法：將180只健康清潔級NIH種系雌性小鼠，體重12-14g，隨機(jī)分組，用同批結(jié)合物稀釋成每毫升含多

2、糖10μg、5μg、2.5μg、1.5μg和0.5μg，并用Vi多糖免疫小鼠作為對照，分別在第0d和14d免疫，并在7d、21d和28d采血；確定最佳免疫劑量后，將120只同類小鼠隨機(jī)分為三組，每組40只，分別為傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗組、Vi多糖組和生理鹽水對照組，免疫小鼠，分離血清，采用間接ELISA法測定不同時間點血清中特異性IgA、IgM、IgG及其亞類(IgG1、IgG2a、IgG3)的抗體滴度；用流式細(xì)胞儀檢測淋巴細(xì)胞懸液中CD

3、4<'+>、CD8<"+>T細(xì)胞的數(shù)量變化。 結(jié)果：五種不同劑量免疫小鼠第一針后，每毫升含2.5μg多糖的結(jié)合物免疫小鼠后的滴度較10μg的略低，但二者沒有顯著性差異(P>0.05)，而且在免疫第二針后，用10μg/只免疫的小鼠抗體滴度下降較2.5μg/只的快；免疫一針后，Vi多糖結(jié)合疫苗組的IgG抗體滴度明顯升高，第二針有加強(qiáng)效應(yīng)(P<0.01)；所測3種IgG亞型，Vi多糖結(jié)合疫苗組中IgG1、IgG2a和IgG3的滴度均較

4、Vi多糖抗原組的高，且IgG2a抗體滴度升高更為明顯；Vi多糖和結(jié)合疫苗免疫小鼠后，血清中IgA和IgM抗體滴度均有顯著升高，但無加強(qiáng)應(yīng)答。從流式細(xì)胞儀檢測來看，CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞的數(shù)量相對變化不大；第一針和第二針免疫完后，傷寒Vi結(jié)合苗和Vi多糖二者之間均無顯著性差異(P>0.05)：而且在檢測期間結(jié)合苗之間以及Ⅵ多糖之間也無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： ①五種不同劑量比較，用每毫升含2.5μ

5、g多糖的結(jié)合物免疫小鼠為最佳劑量。 ②傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗在免疫小鼠第二針后有很好的加強(qiáng)應(yīng)答效應(yīng)和免疫記憶反應(yīng)，且血清中IgG抗體及其亞類IgG2a的滴度均明顯高于單純注射Vi多糖抗原的；IgG1和IgG3的滴度雖然高于Vi多糖抗原的，但二者無加強(qiáng)應(yīng)答效應(yīng)和免疫記憶反應(yīng)。實驗中，相同時點IgG2a/IgG1>1，顯示傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗免疫小鼠后Th1型反應(yīng)占主導(dǎo)地位。說明免疫傷寒Vi多糖結(jié)合疫苗能增強(qiáng)宿主對微生物感染的免疫性和