大麻素WIN55、212-2對體外培養(yǎng)牛眼小梁細(xì)胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 研究大麻素WIN55，212-2對體外培養(yǎng)的牛眼小梁細(xì)胞MMP-3、MMP-9及TIMP-I表達(dá)的影響，從而探討其降眼壓的機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.牛眼小梁細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：采用組織塊培養(yǎng)法對牛眼小梁細(xì)胞進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng)，對第三代細(xì)胞應(yīng)用免疫組化方法（波形蛋白，NSE，Ⅷ因子相關(guān)抗原染色）進(jìn)行鑒定，應(yīng)用透射電鏡對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)及生長特性的觀察，確定所獲細(xì)胞大多數(shù)為小梁細(xì)胞組織來源；
　

2、　 2.免疫組化SP染色測定MMP-3，MMP-9的量：取傳3代的小梁細(xì)胞經(jīng)消化離心后以5×104個/mL的密度接種于預(yù)置蓋玻片的6孔板中，待細(xì)胞接近融合，更換無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)，饑餓48h后將培養(yǎng)孔隨機(jī)分為6組。1～5組施加含大麻素WIN55，212-2終濃度為0（對照組）、1、10、20、40μmol/L的無血清培養(yǎng)液，第6組為陰性對照組(一抗為PBS)。48h后取出蓋玻片進(jìn)行MMP-3及MMP-9免疫細(xì)胞化學(xué)實驗。每種濃度重復(fù)4次

3、。結(jié)果進(jìn)行計算機(jī)圖像分析并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗。
　　 3.提取上清液用ELASA法檢測隨濃度的不同TIMP-1量的變化：取傳3代小梁細(xì)胞，經(jīng)消化離心后按5×104個/mL的密度接種于96孔板中，待細(xì)胞接近融合后，用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)饑餓48h，使細(xì)胞狀態(tài)盡量達(dá)到同步化。將細(xì)胞隨機(jī)分為5組，每組10個復(fù)孔，分別施加含大麻素WIN55，212-2終濃度為0（對照組）、1、10、20、40μmol/L的無血清培養(yǎng)液。培養(yǎng)48h后吸出對應(yīng)孔中

4、的細(xì)胞上清液分裝于EP管中，應(yīng)用ELASA法檢測隨濃度的不同TIMP-1量的變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 體外培養(yǎng)的牛眼小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及MMP-9；含大麻素WIN55，212-2終濃度為1、10、20、40μmol/L的無血清培養(yǎng)液隨濃度的提高可促進(jìn)牛眼小梁細(xì)胞MMP-3及MMP-9的表達(dá)，并抑制TIMP-1的表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 一定劑量的大麻素可以促進(jìn)牛眼小梁細(xì)胞MMP-3及MMP-9