FGF-1對(duì)人甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1表達(dá)的影響及其機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：觀察 FGF-1對(duì)人甲狀腺癌細(xì)胞中 HMGA1表達(dá)的影響，并初步探討PI3K/AKT通路在FGF-1調(diào)控HMGA1表達(dá)過(guò)程中的作用。
　　方法：以體外培養(yǎng)的人甲狀腺癌細(xì)胞 SW-579為研究對(duì)象，分別以不同濃度的FGF-1處理SW-579細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光法檢測(cè)HMGA1 mRNA以及蛋白的表達(dá)。同時(shí)應(yīng)用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫熒光法檢測(cè)以25ng/mL和35ng/mL FGF-1分別

2、處理人甲狀腺癌細(xì)胞后不同時(shí)間HMGA1 mRNA及蛋白的表達(dá)。應(yīng)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析 FGF-1對(duì)轉(zhuǎn)染入人甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1啟動(dòng)子活性的影響。為了進(jìn)一步研究 FGF-1調(diào)控人甲狀腺癌細(xì)胞HMGA1的機(jī)制，用PI3K/AKT通路抑制劑（LY294002和Wortmannin）處理細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR和免疫熒光法檢測(cè)SW-579細(xì)胞經(jīng)FGF-1刺激后HMGA1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1）RT-PCR結(jié)果顯示：不同

3、濃度FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，15ng/mL、25ng/mL、35ng/mL FGF-1組甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1 mRNA均明顯升高(p<0.05)，而5ng/mL FGF-1組無(wú)明顯改變。FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞不同時(shí)間后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GF-1處理3小時(shí)、6小時(shí)、9小時(shí)、12小時(shí)后甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1 mRNA均升高(p<0.05)，但各組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。PI3K抑制劑處理甲狀腺癌

4、細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GF-1組HMGA1 mRNA水平升高(p<0.05)，與FGF-1組相比，PI3K通路抑制劑組甲狀腺癌細(xì)胞HMGA1 mRNA水平下降(p<0.05)。2）實(shí)時(shí)定量PCR顯示：不同濃度FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，25ng/mL、35ng/mL FGF-1組甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1 mRNA增加(p<0.05)，但5ng/mL、15ng/mLFGF-1組的升高無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。FGF-

5、1處理甲狀腺癌細(xì)胞不同時(shí)間后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞6小時(shí)、9小時(shí)、12小時(shí)后，其HMGA1 mRNA增加(p<0.05)，但組內(nèi)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。3）熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)顯示：不同濃度FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，其 HMGA1啟動(dòng)子活性在15ng/mL、25ng/mL、35ng/mL FGF-1組均升高(p<0.05)，各組內(nèi)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，而5ng/mL FGF-1

6、組HMGA1啟動(dòng)子活性無(wú)明顯變化。FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞不同時(shí)間后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GF-1處理6小時(shí)、9小時(shí)、12小時(shí)后甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1啟動(dòng)子活性均升高(p<0.05)，且以9小時(shí)、12小時(shí)組升高最明顯(p<0.05)。4）免疫熒光結(jié)果顯示：不同濃度的FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞后，熒光所標(biāo)記的HMGA1蛋白主要分布在細(xì)胞核，與對(duì)照組相比，加入FGF-1后，甲狀腺癌細(xì)胞核中HMGA1蛋白均增加。FGF-1處理甲狀腺癌細(xì)胞不同

7、時(shí)間后，與對(duì)照組相比，F(xiàn)GF-1處理3小時(shí)、6小時(shí)、9小時(shí)、12小時(shí)后甲狀腺癌細(xì)胞核中HMGA1蛋白均增加。PI3K抑制劑處理甲狀腺癌細(xì)胞后，熒光所標(biāo)記的HMGA1蛋白主要分布在細(xì)胞核，與空白組相比，F(xiàn)GF-1組甲狀腺癌細(xì)胞核的HMGA1蛋白增加，與FGF-1組相比，PI3K通路抑制劑組甲狀腺癌細(xì)胞核HMGA1蛋白明顯減少。
　　結(jié)論：1）FGF-1能上調(diào)人甲狀腺癌細(xì)胞中HMGA1 mRNA和蛋白水平。2） PI3K/AKT信號(hào)通