活體誘導(dǎo)高效提取水蛭素工藝研究.pdf

1、本項研究對比三種傳統(tǒng)提取水蛭素的方法，采用仿生法刺激活體水蛭使其分泌出唾液，瞬間收集水蛭唾液，然后應(yīng)用超濾對唾液進行高效快速膜分離純化，再經(jīng)離子交換和凝膠過濾層析中間純化，最后應(yīng)用高效液相進一步純化得到高純度的水蛭素，達到多次高效提取水蛭素的目的。 其中傳統(tǒng)提取水蛭素的方法采用硫酸銨沉淀法、PH值沉淀法、有機沉淀法；活體誘導(dǎo)采用豬血+田螺聯(lián)合誘導(dǎo)的方式誘導(dǎo)出水蛭唾液，然后再收集水蛭唾液。粗級分離比較了PH值沉淀法、硫酸銨沉淀法、

2、有機沉淀法及超濾膜分離法。DEAE-纖維素離子交換層析用0.05mol/L，pH6.0磷酸鹽緩沖液平衡，0-1.0mol/LNacl梯度洗脫，流速30mL/h，進樣量為100ml。所得到的水蛭素溶液蛋白質(zhì)回收率為6.05％，活性回收率為78.86％，純化倍數(shù)為17.34，比活為201.59ATU/mg。SephadexG-25凝膠過濾樹脂層析，以30mL/h的流速效果最好，其收集液比活為1132ATU/mg，蛋白質(zhì)回收率為8.020，活

3、性回收率為71％，純化倍數(shù)為8.83ATU/mg。HPLC檢測水蛭素純度為92.10％。 該工藝的研究，不但保護了黑龍江省醫(yī)學(xué)的自然資源，極大的促進和帶動水蛭人工養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，也為周邊經(jīng)濟增加了新的經(jīng)濟增長點，同時為我國天然水蛭素的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供了技術(shù)理論依據(jù)，使有限的水蛭自然資源達到可持續(xù)利用的目的。因此，該項研究在充分挖掘天然水蛭自身潛在的經(jīng)濟價值外，還推動了水蛭養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，必將為我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和農(nóng)業(yè)增效，農(nóng)民增收作