硫化氫預處理對肝纖維化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用及其相關機制.pdf

1、目的:
　　探討硫化氫對肝纖維化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用并初步研究其機制。
　　方法:
　　64只SD大鼠通過膽總管結扎法建立大鼠肝纖維化模型，從存活大鼠中隨機取32只大鼠隨機分為4組:包括①假手術組（Sham組），②肝臟缺血再灌注損傷組(HIRI組)，③NaHS預處理組(NaHS組)，④NaHS預處理+PI3K抑制劑組（LY294002組），通過Pringle法阻斷肝門30min及恢復灌注4h引發(fā)肝臟缺血再灌

2、注損傷。①Sham組:僅開腹顯露肝蒂，不阻斷血流。②HIRI組:開腹顯露肝蒂，應用Pringle法行肝門阻斷，使肝臟缺血30min，后開放肝門，使肝臟恢復灌注4h。③NaHS處理組于HIRI前30min經(jīng)腹腔注射NaHS42umol/kg，隨后處理同HIRI組。④LY294002組于HIRI前1h經(jīng)尾靜脈注射LY29400210umol/kg，于HIRI4h后處死大鼠，分別取血液及肝組織，測血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素水平;測定肝

3、組織MDA水平、SOD水平;取左肝外葉組織，透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬體形態(tài)及數(shù)量;取左肝外葉組織，制成10％組織勻漿。應用WesternBlot技術檢測各組細胞自噬特異性標記蛋Beclin1、LC3B以及AKt蛋白表達水平的變化。
　　結果:
　　1:肝纖維化大鼠動物模型的建立:取各實驗組大鼠血清，檢測總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平，分別與假手術組之間進行比較，檢測

4、發(fā)現(xiàn)結扎組TBIL、DBIL、AST、ALT較正常大鼠均顯著升高(p＜0.05)，肝組織切片Masson染色病理學鏡檢，結扎18天組大鼠大部分處于肝纖維化Ⅲ期階段。
　　2:生化指標檢測:與假手術對比，各組谷草轉(zhuǎn)氨酶水平均顯著升高(p＜0.05)，其中NaHS組及LY294002組較HIRI組損傷減輕(p＜0.05)，LY294002組相比NaHS組損傷加重(p＜0.05)。
　　3:MDA水平及SOD水平檢測:在肝纖維化大

5、鼠缺血再灌注4h后，與假手術組對比，各組SOD水平均顯著降低(p＜0.05)，其中HIRI組降低最明顯，各組MDA水平均顯著升高(p＜0.05);NaHS組及LY294002組較HIRI組SOD水平高(p＜0.05)，MDA水平低(p＜0.05);LY294002組相比NaHS組SOD水平低(p＜0.05)，MDA水平高(p＜0.05)。
　　4:自噬指標檢測:1）自噬體的檢測:與假手術組對比，電子顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)各組自噬體均較假手

6、術組增多，NaHS預處理組相比HIRI組自噬體數(shù)量較少，LY294002組相比NaHS預處理組自噬體數(shù)量增多;2）Beclin1、LC3B以及AKt蛋白的表達情況:與假手術組對比，各組Beclin1表達水平均升高(p＜0.05)，NaHS預處理組與HIRI組比較其Beclin1表達水平減低(p＜0.05)，LY294002干預組相比NaHS預處理組其Beclin1表達水平增高(p＜0.05);與假手術組相比，各組LC3B表達水平均升高(

7、P＜0.05)，NaHS預處理組與HIRI組比較其LC3B表達水平減低(p＜0.05)，LY294002干預組相比NaHS預處理組其LC3B表達水平增高，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.05);與假手術組對比，HIRI組Akt蛋白表達水平?jīng)]有顯著差別(P＜0.05)，NaHS預處理組與HIRI組比較Akt蛋白表達水平升高(P＜0.05)，LY294002干預組相比NaHS預處理組其Akt表達水平降低，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(p＜0.05