應(yīng)用人臍帶間充質(zhì)干細胞修復(fù)牙移植術(shù)后牙周組織損傷的實驗研究.pdf

1、自體牙移植術(shù)是一種將自體牙從原位置移植到受區(qū)牙槽窩,用來治療牙列缺損的一種外科治療方法。有學(xué)者報道牙移植術(shù)的手術(shù)成功率超過了90％,提示該技術(shù)作為治療牙列缺損的外科手段之一,具有廣闊的前景和應(yīng)用價值。
　　雖然牙移植術(shù)有著較高的手術(shù)成功率,仍有許多因素影響移植牙的存活時間,如移植牙的離體時間、移植牙牙根與受區(qū)牙槽骨的外形、患者年齡等。所有因素都可以歸結(jié)為“牙周組織的狀況和愈合程度”。因此,改善牙周組織的狀況,提高其愈合能力是提高牙

2、移植手術(shù)成功率的主要方法之一。
　　牙周膜干細胞是存在于牙周組織中具有多向分化潛能、在牙周組織損傷修復(fù)中起重要作用的一種成體干細胞。通過調(diào)節(jié)牙周膜干細胞的細胞活性,可以增強牙移植術(shù)后牙周組織的修復(fù)能力,提高牙移植術(shù)的手術(shù)成功率。然而牙周膜干細胞的細胞來源是一個主要問題,需要提前安排手術(shù)取材,才能得到個體化的牙周膜干細胞。骨髓間充質(zhì)干細胞和牙周膜干細胞類似,也是一種來源于中胚層的成體干細胞,具有多向分化的能力,可以用作牙周組織損傷修

3、復(fù)的種子細胞,提高牙移植術(shù)的手術(shù)成功率。但是骨髓間充質(zhì)干細胞的取材也是“有創(chuàng)”的,并不能適用于所有病例?！澳殠чg充質(zhì)干細胞”或許是最佳選擇。來源于臍帶組織的臍帶間充質(zhì)干細胞具有細胞來源豐富、無創(chuàng)取材、易于獲取、無論理學(xué)限制、低免疫原性等特性,很適合作為一種新型種子細胞,用于牙周組織損傷的修復(fù),提高牙移植術(shù)的手術(shù)成功率。
　　本研究擬通過體外實驗,研究并細化了臍帶間充質(zhì)干細胞的成骨特性;通過體內(nèi)實驗,模擬牙周組織愈合情況,研究臍帶間

4、充質(zhì)干細胞是否適合用于提高牙移植術(shù)的手術(shù)成功率。
　　實驗一人臍帶間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
　　目的:通過原代培養(yǎng)得到本研究所需的臍帶間充質(zhì)干細胞,并對細胞性質(zhì)進行鑒定。
　　方法:通過酶消化法進行臍帶間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng);通過流式細胞技術(shù)對獲得細胞的表面CD分子進行鑒定,包括CD29、CD146、CD105、CD34、CD44、CD45。
　　結(jié)果:通過酶消化法可以獲得大量的人臍帶間充質(zhì)干細胞,培養(yǎng)方法簡

5、單易行,結(jié)果穩(wěn)定;流式鑒定結(jié)果顯示人臍帶間充質(zhì)干細胞與其他間充質(zhì)干細胞類似,表達干細胞表面標(biāo)記物CD29(99.8%)、CD44(99.9%)、CD146(92.8)、CD105(98.9%),但不表達造血譜系標(biāo)記物CD34(1.52%)、CD45(1.76%)。
　　結(jié)論:通過酶消化法可以順利的得到人臍帶間充質(zhì)干細胞,該細胞高表達間充質(zhì)干細胞表面標(biāo)記物,可以用于后期的實驗研究。
　　實驗二人臍帶間充質(zhì)干細胞成骨分化的體外實

6、驗研究
　　目的:研究人臍帶間充質(zhì)干細胞的成骨分化及其在成骨誘導(dǎo)過程中干細胞和成骨相關(guān)標(biāo)記物的變化情況。
　　方法:通過茜素紅染色、Van Kossa染色和細胞免疫熒光技術(shù)對成骨誘導(dǎo)后的細胞進行鑒定;在成骨誘導(dǎo)過程中設(shè)立時間點(0d、7d、14d、21d),通過流式細胞技術(shù)對干細胞標(biāo)記物CD146和SOX2進行檢測;對堿性磷酸酶、CD146/SOX2(mRNA水平)、骨橋蛋白/骨涎蛋白/Runx2(mRNA水平和蛋白水平)進

7、行檢測。
　　結(jié)果:對細胞進行成骨誘導(dǎo)21天后茜素紅、Van Kossa染色陽性,免疫熒光染色檢測到胞漿內(nèi)大量表達骨橋蛋白和骨涎蛋白;干細胞標(biāo)記物CD146和SOX2在誘導(dǎo)過程中呈下降趨勢;堿性磷酸酶活性在第7天時即表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學(xué)差異的升高,骨橋蛋白/骨涎蛋白(mRNA水平和蛋白水平)在成骨誘導(dǎo)過程中呈上升趨勢,7天或14天既有顯著性差異;Runx2(蛋白水平)在第7天時達到峰值,隨后下降。
　　結(jié)論:人臍帶間充質(zhì)干細胞的

8、成骨分化過程是一個連續(xù)的過程;體外誘導(dǎo)7d后成骨分化進行已經(jīng)全面啟動;經(jīng)過誘導(dǎo)的人臍帶間充質(zhì)干細胞比未誘導(dǎo)的細胞更適合用于骨缺損修復(fù)。
　　實驗三應(yīng)用人臍帶間充質(zhì)干細胞模擬牙移植術(shù)后牙周組織再生的體內(nèi)實驗研究
　　目的:通過體內(nèi)實驗?zāi)M牙移植術(shù)后牙周組織的愈合情況。
　　方法:將7d預(yù)誘導(dǎo)的干細胞做為“實驗組”,無誘導(dǎo)的干細胞為“對照組”。牙本質(zhì)、生物蛋白膠和人臍帶間充質(zhì)干細胞混合制作成一種“植入復(fù)合體”,通過植入免疫