膠原三股螺旋重疊蛋白1基因在喉癌組中表達(dá)及其意義.pdf

1、目的:
　　喉癌作為耳鼻咽喉-頭頸外科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)。喉癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多階段和多基因參與的過(guò)程，由多種癌基因的激活、抑癌基因的失活及凋亡基因的失控相互作用引起的。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)膠原三股螺旋重疊蛋白1(CTHRC1)在喉癌組織中的表達(dá)水平，分析CTHRC1的表達(dá)與各臨床病理因素之間的關(guān)系及臨床意義，初步研究其在喉癌發(fā)生發(fā)展中的意義，為喉癌的早期診斷及基因治療提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

2、
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)象:材料來(lái)源于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2008年2月至2013年10月耳鼻咽喉-頭頸外科的住院的喉癌手術(shù)患者，選取喉鱗癌標(biāo)本62例，均經(jīng)病理證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌，臨床分期采用國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)2002年公布的TNM分類(lèi)分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅰ、Ⅱ期42例，Ⅲ期20例，聲門(mén)上型33例，聲門(mén)型29例。年齡42～75歲，中位年齡59歲。對(duì)聲門(mén)型Ⅰ、Ⅱ期喉癌行喉部分切除術(shù)，Ⅲ期行次全切除喉或全切術(shù)，聲門(mén)上型Ⅰ、Ⅱ期行水平半喉

3、切除，Ⅲ期行喉次全切除或喉全切除術(shù)，其中15例獲得相應(yīng)聲門(mén)上型癌旁喉正常粘膜作為對(duì)照（取距癌緣5mm處），經(jīng)病理證實(shí)為炎癥或正常粘膜，其中男性56例，女性6例，高分化38例，中分化14例，低分化10例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有13例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有49例;上述組織為喉鱗癌石蠟標(biāo)本。
　　為了驗(yàn)證免疫組化的結(jié)果，我們收集20例聲門(mén)上型和聲門(mén)型喉鱗癌組織與癌旁5mm以上的正常上皮組織（經(jīng)病理證實(shí)無(wú)瘤組織浸潤(rùn)）的冰凍(-80)標(biāo)本提取mRNA

4、。其中男18例，女2例，高-中分化17例，低分化3例，Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ期8例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例，全部患者術(shù)前均未接受放射治療和化學(xué)治療，臨床資料完整，通過(guò)倫理委員會(huì)審查。
　　1應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry， IHC) S-P二步法檢測(cè)62例喉鱗癌組織，15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1基因的蛋白表達(dá)情況，并檢測(cè)CTHRC1是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)存在表達(dá)差異，并統(tǒng)計(jì)分析它們與臨床病理因

5、素的相關(guān)性。
　　2應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)20例喉鱗癌冰凍(-80℃)組織及20例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的mRNA表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)分析驗(yàn)證它們與臨床病理因素的相關(guān)性。
　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Pearson's Chi-Square檢驗(yàn)分析CTHRC1 mRNA及蛋白的表達(dá)與喉鱗癌患者臨床病理因素的關(guān)系;RT-PCR結(jié)果采用Independent-

6、Samples T檢驗(yàn)分析。以P＜0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義，以P＜0.01為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著意義。
　　結(jié)果:
　　1 CTHRC1 mRNA及蛋白在喉鱗癌組織和癌旁喉正常粘膜中的表達(dá)及其與臨床病理因素之間的關(guān)系。
　　1.1免疫組化法:應(yīng)用S-P二步法檢測(cè)(1)62例喉鱗癌組織和15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的蛋白表達(dá)情況，細(xì)胞漿中陽(yáng)性表達(dá)率分別為79.03％(49/62)和13.33％(2/15)

7、，前者明顯高于后者，二者統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異具有非常顯著性意義（P＜0.01），CTHRC1在喉鱗癌組織中的蛋白表達(dá)明顯高于癌旁喉正常粘膜組織。(2) CTHRC1在喉鱗狀細(xì)胞癌有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá):CTHRC1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的喉癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為92％(23/25)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的喉癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為70.27％(26/37)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，二者差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有意義(P＜0.05）。在喉鱗

8、癌中CTHRC1的蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)（P＜0.05），而與臨床分型、性別及年齡分組無(wú)關(guān)（P＞0.05）。
　　1.2 RT-PCR法:應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)20例喉鱗癌組織和20例癌旁喉正常粘膜組織中CTHRC1 mRNA的表達(dá)情況，喉鱗癌組織的mRNA的平均灰度值為0.93±0.15，而配對(duì)正常喉組織中CTHRC1的mRNA的平均灰度值為0.29±0.23， CTHRC1在喉鱗癌組織中的mRNA表達(dá)明顯高于癌旁喉

9、正常粘膜組織，二者統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異具有非常顯著性意義(P＜0.01)（圖一、二）;在喉鱗癌中CTHRC1 mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）、臨床分期(P＜0.01)相關(guān)，而與臨床分型、性別及年齡分組無(wú)關(guān)(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1在喉鱗癌組織中，CTHRC1呈高表達(dá)，提示其可能與喉鱗癌的發(fā)生進(jìn)展相關(guān)。
　　2在喉鱗癌組織中，CTHRC1呈高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)而與腫瘤病理學(xué)分級(jí)、性別及年齡分組