黃花烏頭發(fā)根培養(yǎng)及植株再生研究.pdf

1、黃花烏頭(Aconitum coreanum(Levl.) Rapaics)發(fā)根系A0489可以通過液體培養(yǎng)的方式進行繁殖，增長速度快，生產(chǎn)周期短（約40 d），所含藥用成分關附甲素含量僅比天然5、6年生黃花烏頭塊根含量低0.06％(DW)，可以實現(xiàn)工業(yè)集約化生產(chǎn)，具有廣闊的應用前景和利用價值。本研究以黃花烏頭發(fā)根為研究對象，探尋發(fā)根生長最適培養(yǎng)條件，并利用球形氣升式生物反應器培養(yǎng)發(fā)根條件進行了探索與優(yōu)化。以黃花烏頭發(fā)根為外植體誘導再生

2、轉(zhuǎn)基因植株，獲得不同誘導時期植株材料，并對誘導過程中一些時期進行了組織學切片觀察，明確了不同時期的組織學結(jié)構(gòu)。
　　1.黃花烏頭發(fā)根生長受到培養(yǎng)方式、pH值、培養(yǎng)基成分及外源物質(zhì)的影響。對黃花烏頭發(fā)根固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)兩種方式進行比較，結(jié)果表明固體培養(yǎng)發(fā)根生長慢，增長系數(shù)低，常用于材料的保存;液體培養(yǎng)發(fā)根生長快，增長系數(shù)高，常用于材料的擴繁。培養(yǎng)基在滅菌前后pH值會有所降低，澄清度發(fā)生變化，滅菌前培養(yǎng)基pH值為5.80時發(fā)根生長較

3、優(yōu)。培養(yǎng)基中各成分分別擴大10、20、30倍后，Zn2+擴大20倍時發(fā)根的生長量最大，擴大Fe2+時發(fā)根很快褐化死亡。在發(fā)根培養(yǎng)初期加入外源物質(zhì)SA、YE、MeJA、CH，各濃度SA、YE對發(fā)根生長無促進作用，各濃度MeJA、CH對發(fā)根的生長有一定的抑制作用。
　　2.黃花烏頭發(fā)根的生長受到培養(yǎng)容器、發(fā)根接種狀態(tài)、接種量等多方面的影響，研究發(fā)現(xiàn):隨著培養(yǎng)容器的增大，發(fā)根長度及生物量均逐漸增加，這表明了黃花烏頭發(fā)根擴大培養(yǎng)的可行性，

4、發(fā)根在較小容器中折干率相對較大，但增長系數(shù)較低;5L反應器中加入2L培養(yǎng)基，接入20g/罐固體培養(yǎng)的發(fā)根培養(yǎng)時，發(fā)根生長狀態(tài)較好，增長系數(shù)較大。
　　3.黃花烏頭發(fā)根誘導再生成苗過程中，發(fā)根在光下逐漸膨大進而脫分化形成胚性愈傷組織，然后再分化形成不定芽及植株，再經(jīng)過生根誘導，形成完整的再生植株。愈傷誘導、芽分化及繼代增殖最適培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA1.0-2.0 mg/L+ NAA0.1 mg/L+蔗糖3％;再生植株生根培養(yǎng)