小麥抗赤霉病基因表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定.pdf

1、禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）引發(fā)的小麥赤霉病是一種世界性真菌病害，不僅造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且由鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素極大的危害了人畜健康。由于天然抗性資源的匱乏和發(fā)病機制的復(fù)雜性使抗赤霉病轉(zhuǎn)基因育種工作進(jìn)展緩慢。近年來，RNA干擾技術(shù)成為植物抗病研究工作的新手段。本研究以小麥轉(zhuǎn)化載體為骨架，構(gòu)建了小麥農(nóng)桿菌和基因槍RNAi載體，利用雙啟動子啟動基因的轉(zhuǎn)錄，提高了基因轉(zhuǎn)錄的效率;將禾谷鐮刀菌關(guān)鍵基因的RNAi片

2、段構(gòu)建到小麥表達(dá)載體中，加強了基因沉默效果，為下一步小麥遺傳轉(zhuǎn)化提供了材料。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以實驗室已有的雙邊界農(nóng)桿菌表達(dá)載體為基礎(chǔ)，構(gòu)建了含雙啟動子的小麥雙邊界農(nóng)桿菌RNAi載體，雙啟動子包含ubi、cmps、lem2、lem1和CaMV35S的兩兩組合，增強了外源基因的表達(dá)，其篩選標(biāo)記基因均為UPMI，篩選標(biāo)記的啟動子為ubi、cmps或改造后的cmpsΩ。同時構(gòu)建了含雙啟動子的小麥單邊界農(nóng)桿菌RNAi載體，雙啟動

3、子為ubi、cmps，以PMI為篩選標(biāo)記基因，篩選標(biāo)記啟動子為ubi。
　　2.以單基因單片段、單基因雙片段、多基因雙片段或多基因多片段的方式構(gòu)建形成RNA干擾結(jié)構(gòu)，用于小麥農(nóng)桿菌RNAi載體。
　　3.構(gòu)建了單啟動子的雙RNA干擾片段的小麥基因槍表達(dá)載體和農(nóng)桿菌表達(dá)載體。雙片段包含禾谷鐮刀菌幾丁質(zhì)合成酶基因Chs7的第3、4個片段，蛋白激酶C基因Pkc的第3個片段的兩兩組合。
　　4.以實驗室已有的雙啟動子擬南芥載體