蚯蚓糞中黃瓜枯萎病菌拮抗細(xì)菌的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及防治效果.pdf

1、黃瓜枯萎病是一種真菌土傳病害，由尖孢鐮孢菌黃瓜專化型引起，具有毀滅性，在全世界范圍內(nèi)發(fā)生，且在我國各地區(qū)都存在。黃瓜的產(chǎn)量會(huì)因?yàn)榭菸《档?0％～30％，糟糕時(shí)甚至可達(dá)80％～90％，黃瓜生產(chǎn)中，最嚴(yán)重的就是枯萎病，能造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。黃瓜種植區(qū)域連年增長，因此黃瓜枯萎病也越來越嚴(yán)重。所以，對(duì)黃瓜枯萎病的防治方法研究已成為生產(chǎn)中的重要問題。目前，藥物控制是一個(gè)重要的方法防治枯萎病，然而因?yàn)槿鄙傩矢摺⒍拘孕?、沒污染的殺菌劑，農(nóng)藥殘留

2、會(huì)威脅人類的身體健康。因?yàn)榭菸∈峭羵鞑『?，土壤藥劑處理面積過大，很難進(jìn)行，耗資很高。現(xiàn)代社會(huì)不斷發(fā)展，人們?cè)絹碓街匾暦俏廴镜木G色食品，并且越來越重視環(huán)境保護(hù)，生物防治已引起人們的關(guān)注。集價(jià)格低廉、抑制植物病蟲害發(fā)生效果顯著、同時(shí)增加作物產(chǎn)量、提高品質(zhì)等多種積極作用于一身的蚯蚓糞進(jìn)入了人們的視野。本研究從蚯蚓糞中篩選對(duì)黃瓜枯萎病菌具有拮抗作用的微生物，以期為今后生防菌在黃瓜枯萎病的防治奠定基礎(chǔ)。
　　采用稀釋平板法，從新鮮蚯蚓糞中

3、分離到374株細(xì)菌。篩選出對(duì)黃瓜枯萎病菌有拮抗活性的菌株28株，其中以D2的抑菌效果最好，抑菌直徑達(dá)28.28mm，且抑菌效果穩(wěn)定。
　　D2單菌落形態(tài)為圓形或近圓形，扁平狀，中等大小，表面光滑，不透明。革蘭氏染色為陰性。菌體桿狀，不產(chǎn)生芽孢，(0.5～1.0)um×(1.5～4.0)um。在4℃不生長，41℃可以生長。在NaCl濃度小于5％時(shí)可生長，大于7％時(shí)不生長。不產(chǎn)生熒光，可使明膠液化，可分解淀粉。D2的分子生物學(xué)鑒定中，

4、得到目的片段大小為1462bp，將得到的PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果和Genbank里的序列進(jìn)行同源性比較，顯示該菌株為洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderiacenocepacia）。
　　對(duì)D2的發(fā)酵培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，篩選出最佳實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵配方:酵母膏1％，蔗糖0.5％，NaCl0.3％，NH4NO30.3％;最佳培養(yǎng)條件:發(fā)酵溫度30℃，培養(yǎng)基pH6.0，接種量2.0％，裝液量為100mL的三角瓶中裝液40mL。

5、　　D2發(fā)酵液優(yōu)化條件下的對(duì)黃瓜治療試驗(yàn)，D2稀釋50倍時(shí)防效達(dá)70.48％，稀釋100倍時(shí)防效達(dá)69.89％，稀釋150倍時(shí)防效達(dá)69.58％，多菌靈防效達(dá)78.09％，D2稀釋50倍防效僅次于多菌靈的防效。D2發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病預(yù)防試驗(yàn)，D2發(fā)酵液稀釋50倍時(shí)，防治效果達(dá)到77.82％，稀釋100倍時(shí)，防治效果為77.56％，稀釋150倍時(shí)，防治效果為76.52％，多菌靈防效達(dá)70.59％，D2發(fā)酵液稀釋50倍時(shí)防效比多菌靈的防效多