海南萬寧小海近岸表層海水的細(xì)菌調(diào)查及海南近岸副溶血弧菌的分子分型.pdf

1、本文還從海南島周邊部分縣市的近岸海域及水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)水體中分離并運(yùn)用PCR方法結(jié)合生化鑒定獲得126株副溶血弧菌，應(yīng)用RAPD技術(shù)對(duì)所分離菌株進(jìn)行分子分型，根據(jù)RAPD技術(shù)對(duì)126株副溶血弧菌擴(kuò)增結(jié)果構(gòu)建了聚類圖和遺傳距離矩陣。 細(xì)菌數(shù)量調(diào)查結(jié)果顯示：萬寧小海調(diào)查各站位的總菌數(shù)為2.1×105～2.7x108cfu/mL：活菌數(shù)為1.1×105～1.6×107cfu/mL；異養(yǎng)菌數(shù)為1.3×103～8.5x104cfu/mL：弧

2、菌數(shù)為4.0x10～5.7x103cfu/mL。不同季節(jié)萬寧小?；罹涂偩鷶?shù)量分布的研究結(jié)果表明，除個(gè)別站位外，海水中活菌和總菌數(shù)變化的趨勢(shì)是夏季較高，冬季較低；但海水中異養(yǎng)菌和弧菌的數(shù)量分布則為氣候較為溫和的春、秋季較高，而溫度較高和較低的夏、冬季數(shù)量則較低。相關(guān)性分析顯示，弧菌數(shù)量與鹽度及酸堿度呈顯著正相關(guān)；總菌和活菌數(shù)量與溫度呈顯著正相關(guān)；總菌和活菌之間存在顯著的正相關(guān)性；弧菌和異養(yǎng)菌之間存在顯著的正相關(guān)性。根據(jù)異養(yǎng)菌數(shù)量對(duì)小海水

3、體質(zhì)量的評(píng)估結(jié)果為中度到重度污染。 弧菌種類調(diào)查結(jié)果顯示：從萬寧小海表層水體分離的弧菌主要有溶藻弧菌(V。alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和霍亂弧菌(V.cholerae)等7種，其中溶藻弧菌、副溶血弧菌和霍亂弧菌的檢出時(shí)間主要集中在夏季和秋季；河流弧菌(V.fluvialis)的檢出時(shí)間主要集中在春季和夏季；創(chuàng)傷弧菌(V.vulnificus)在全年都有檢出且檢出率沒有顯著變化；

4、哈維弧菌(V.harveyi)和擬態(tài)弧菌(V.mimicus)的檢出時(shí)間主要集中在冬季。相關(guān)性分析結(jié)果表明，弧菌分布與溫度、鹽度、溶解氧和酸堿度存在的相關(guān)性因不同弧菌種類、不同站位和不同季節(jié)而異。聚類分析結(jié)果表明，萬寧小海在夏季和秋季的弧菌組成相似性最高;距離較近的站位的弧菌組成的相似性通常也較高。 應(yīng)用RAPD技術(shù)對(duì)所分離的126株副溶血弧菌菌株進(jìn)行分子分型以及對(duì)這126株副溶血弧菌擴(kuò)增結(jié)果構(gòu)建的聚類圖和遺傳距離矩陣結(jié)果表明，

5、所分離的126株副溶血弧菌間最小遺傳距離為0.004，最大遺傳距離為0.742；副溶血弧菌菌株間的遺傳分化和RAPD遺傳聚類群的分布受地理因素的影響顯著，相同地區(qū)或臨近地區(qū)菌株的遺傳分化小，而不同地區(qū)的分化大。相同地理來源的菌株具有更近的親緣關(guān)系而不同地理來源的菌株間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。根據(jù)RAPD分型結(jié)果挑選了15株副溶血弧菌對(duì)羅非魚(tilapia)進(jìn)行感染試驗(yàn)并測(cè)定其半致死濃度(LD50值)，結(jié)果表明，編號(hào)為VP-02和VP-05的菌