馬鹿（Cervus elaphus）鹿茸角化細(xì)胞生長因子（KGF）：基因克隆、序列分析及轉(zhuǎn)錄模式研究.pdf

1、東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文馬鹿（Cervus elaphus）鹿茸角化細(xì)胞生長因子（KGF）：基因克隆、序列分析及轉(zhuǎn)錄模式研究姓名：鄭文靜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生理學(xué)指導(dǎo)教師：鄭冬;肖向紅20060601●東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tA s a s p e c i f i cm i t o g e nf o re p i t h e l i a lc e l l s ，K e r a t i n o c y t

2、 eG r o w t h F a c t o r ( K G Fo rF G F - 7 ) ，t h es e v e n t hm e m b e r o fF i b r o b l a s t G r o w t hF a c t o r s ( F G F s ) f a m i l y , c o u l di n d u c e p r o l i f e r a t i o n ，d i f f e r e n t i

3、 a t i o n a n dm o t i l i t y , a n de n h a n c e e p i t h e l i a l w o u n dr e p a i r ．T oc l a r i f yt h ep o s s i b l er o l e sK G F m a yp l a yi nd e e ra n t l e rd e v e l o p m e n t a n dr e g e n e r

4、a t i o n ，f o rt h ef i r s t t i m ei nt h i st h e s i s ，K G Fg e n e ( A c c e s s i o nN o ．A Y 9 2 3 8 5 8 ) w a sc l o n e df r o m 9 0 一d a yd e e r a n t l e ro f r e dd e e r ( C e r v u se l a p h u s ) b yt

5、w os t e pR T - P C R m e t h o d ．B o t hK G F D N Aa n da m i n oa c i d s s e q u e n c e s o fh u m a n ，r e dd e e Lm o u s e ，s h e e p ，d o ga n dp i g ，w e r eu s e df o r f o l l o w i n gb i o i n f o r m a t i

6、 c a n a l y s i s a n d s e m i - q u a n t i t a t i v e R T - P C R m e t h o d w a s f u r t h e r u s e d t o e x p l o r e s p a c i a lt r a n s c r i p t i o n a ld y n a m i c so f s u c hg r o w t h f a c t o r

7、 sa sK G F , I G F —I ，I G F 一2 ，B M P 一2 ，B M P 一4 ．R e s u l t ss h o w e d ：( 1 ) K G Fg e n eo f r e dd e e rc o n t a i n s5 8 5 b pC D S r e g i o ni n l e n g t h ，w h i c hc o d e s f o r a p u t a t i v e19 4 A

8、ap o l y p e p t i d e ．( 2 ) B i o i n f o r m a t i c s a n a l y s i s s h o w e d ：t h e l i n e a r f i t c u r v e o fK G Fg e n et r a n s i t i o n a n dt r a n s v e r s i o na m o n gt h e s i x s p e c i e s ：

9、Y = 一0 ．4 4 9 2 5 + 0 ．3 7 2 7 8 x ( ∥= O ．8 6 1 15 ) ；t h eM E t r e e st h a t w e r er e c o n s t r u c t e db a s e d o nK G Fg e n ea n dp o l y p e p t i d e s e q u e n c e ，i n d u c e d t h a tc o m p a r e dw

10、i t h o t h e r t h r e e s p e c i e s ，t h eh e r e d i t a r yd i s t a n c eo fr e dd e e r ，s h e e pa n d p i g s h o u l d b ec l o s e ( b o o t s t r a p > 8 6 ％) ，t h i sr e s u l tw a s c o n s i s t e n tw

11、 i t ht h ef u n c t i o n a ld o m a i n sf o r e c a s tr e s u l to f K G F g e n es e c o n d a r y s t r u c t u r e ；F o ra n yt w os p e c i e s ，n e i t h e ri s o l e c t r i cp o i n to rc h a r g ea tP H 7 ．0

12、o f K G F w a s e q u a l ，t h e r e i n t o ，i s o l e c t r i cp o i n t ( 9 ．17 3 ) a n dc h a r g e a tP H7 ．0 0 0 ．7 0 6 ) o fh u m a n w a sl o w e s t ，a n dt h ep i g w a s h i g h e s t ，9 ．4 3 6 a n d1 2 ．7 3 3

13、s e p a r a t e l y ；g e n es e a r c h i n gr e s u l t s ：b a s e do n2 6 9 6m o t i f si nt h eP r o s i t ed a t ab a n k ，K G F m o t i f sw e r ea n a l y s e d ．K G F i n c l u d e d4 6 m o t i f s ，t h e r e i n

14、t o ，F(xiàn) G Ff a m i l ys i g n a t u r e s ，s i g n a lp e p t i d er e l a t e ds i g n a t u r e s ，a n dm e t a b o l i s mr e l a t e ds i g n a t u r e sw e r ev e r yi m p o r t a n t ．I na d d i t i o n ，t r a n s c

15、 r i p t r e g u l a t i o nr e l a t e d s i g n a t u r e sw e r e a l s oi n v o l v e d ，s u c h a sL e u c i n ez i p p e rp a R e m ，Z i n cf i n g e rR I N G - t y p es i g n a t u r e ，Z i n c f i n g e rC 2 H 2t

16、 y p ed o m a i ns i g n a t u r e ，Z i n c f m g e rP H D —t y p e s i g n a t u r e ．I ti n d u c e dt h a t K G F m a yp a r t i c i p a t ei n g e n er e g u l a t i o np r o c e s s ，h o w e v e r ，t od a t et h e r

17、 eh a v e n o tb e e n a n y e v i d e n c e s t o s u p p o r tt h i s v i e w p o i n t ；t h e t y p e s o fK G F g e n em o t i f s v a r i e d i nd i f f e r e n ts p e c i e s ．C o m p a r a t i o no f h K G F a n d

18、 d K G F s h o w e d t h a tt h e r ew a s a 5 ' - n u c l e o t i d a s es i g n a t u r e 1 a t10 5 - 1 0 7 a a s i t e o f h K G F , n o taC a s e i nk i n a s eI Ip h o s p h o r y l a t i o ns i t e a t 1 5 9 —1

19、6 2 a as i t eo fh K G F , h o w e v e rd K G F w a s c o n t r o v e r s a r y , m o r e o v e r , f o rb o t ho f t h e m t y r o s i n e k i n a s ep h o s p h o r y l a t i o ns i t eh a db e e n v a r i e d ．( 3 ) T

20、 h es e m i - q u a n t i t y R T - P C Rw a su s e d t o s t u d y m R N A t r a n s c r i p t i o n a lm o d e lo fK G F , I G F 一1 ．I G F - 2 ，B M P 一2 ，B M P ·4 o np e s t i l e ( A ) ，p r o x i m a lg r o w t h

21、t i p ( B ) ，i n t e r m e d i a n tg r o w t ht i p ( C ) ，d i s t a lg r o w t ht i p ( D ) ，a n d m i d d l er e g i o n s ( E - I ) o f t h es a m e a n t l e rt i s s u e ．T h er e s u l t ss h o w e d ：B M P s h a

22、d n o t r a n s c r i p t o ne a c h s i t e ．T h e v a r i a t i o no f I G F 一1 a n dI G F 一2t r a n s c r i p t s l e v e l c o u l dt e n d t o b ec o n s i s t e n to n s i t e A —I ，h o w e v e r , K G Fa t s i t e

23、Da n d s i t eGw a s d i f f e r e n tf r o mI G F - l a n d I G F 一2 ．T h e r ew a sn oI G F - 1t r a n s c r i p ta tp r o x i m a lg r o w t hs i t e ( B ) ．T h et o t a lt r a n s c r i p t sl e v e lo f I G F - 2 w

24、a s h i g h e r t h a nI G F 一1 ．A l lr e s u l t sa n dd a t aa b o v ec o u l df u r t h e rp r o v i d ei m p o r t a n tb a s e m e n tf o r s t u d y i n gt h er o l eo f K G F i na n t l e r r e g e n e r a t i o n