‘惠’蘋果自交后代葉片離體高效再生體系和遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、為了篩選蘋果離體葉片再生效率較高的基因型，為蘋果轉(zhuǎn)基因研究提供轉(zhuǎn)化受體新材料，本研究以‘惠’自交F1代和‘華富’ב皇家嘎拉’、‘寒富’ב元帥80-3’、‘元帥80-3’ב寒富’雜交F1代實生苗為試材，采用莖段培養(yǎng)獲得試管苗，篩選出增殖能力最強的單株‘惠’自交后代Meg-5，進一步對影響其離體葉片再生不定芽的主要因素進行研究，建立了高效離體葉片再生體系，并在此基礎(chǔ)上，初步建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Meg-5遺傳轉(zhuǎn)化體系。主要研究內(nèi)容和結(jié)

2、果如下:
　　1.不同雜交組合后代試管苗增殖能力
　　不同雜交后代的試管苗增殖能力籌異明顯，‘華富’ב皇家嘎拉’雜交后代試管苗增殖能力較強，其中最強的單株為09-294，增殖系數(shù)為3.06;‘寒富’ב元帥80-3’、‘元帥80-3’ב寒富’2個雜交組合后代試管苗增殖能力均較差，增殖系數(shù)在1.03～1.56。
　　2.Meg-5試管苗離體葉片高效再生體系
　　研究了激素濃度、暗培養(yǎng)時間、葉片部位、葉片放置方式

3、、試管苗苗齡等對Meg-5試管苗離體葉片再生的影響。結(jié)果表明:適宜的再生培養(yǎng)基配方為MS+2.0 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+2.6 g/L膠立得(Gelzan);最佳暗培養(yǎng)時間為14～21 d;從葉尖部到葉柄部再生效率逐漸升高，葉背向下接種優(yōu)于葉背向上;最適試管苗苗齡為20～30 d。在此條件下，Meg-5試管苗離體葉片不定芽再生頻率可達到100％，單片葉平均再生芽數(shù)可達到31.59個。
　　當(dāng)

4、不定芽長至3 cm以上時，將其轉(zhuǎn)至生根培養(yǎng)基1/2MS+0.3 mg/L IBA+0.2 mg/L IAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L瓊脂上，生根率可達100％，平均生根條數(shù)7.26條，平均根長3.9 cm。幼苗移栽成活率100％，獲得完整植株。
　　3.根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Meg-5遺傳轉(zhuǎn)化體系
　　在建立Meg-5試管苗離體葉片高效再生體系的基礎(chǔ)上，研究了抗生素濃度、農(nóng)桿菌菌液濃度、預(yù)培養(yǎng)時間、菌液侵染時間、共培養(yǎng)時間