Nrf2-ARE信號(hào)通路與2型糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究.pdf

1、目的:本研究旨在使用Wistar大鼠建立糖尿病心肌病模型，觀察建模成功后心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化，凋亡及心肌纖維化，氧化應(yīng)激等相關(guān)指標(biāo)及Nrf2的表達(dá)，觀察給予Nrf2/ARE信號(hào)通路激活劑CPDT后HO-1、MDA、Nrf2表達(dá)的變化。通過研究Nrf2/ARE信號(hào)通路表達(dá)與上述指標(biāo)變化的關(guān)系，探討Nrf2/ARE信號(hào)通路在糖尿病心肌病發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:1.建立Wistar大鼠2型糖尿病心肌病模型。將雄性Wistar大鼠3

2、0只隨機(jī)分成正常對(duì)照組(Normal control，正常組)10只、高糖高脂飼料喂養(yǎng)組20只。喂養(yǎng)4周后大鼠禁食10-12小時(shí)，測空腹血糖。第6周腹腔注射30mg/kg鏈脲佐霉素(streptozotocin STZ)1次，建立2型糖尿病心肌病大鼠模型。1周后測空腹血糖≥16.7mmol/L認(rèn)為模型建立成功。將造模成功大鼠分為2組:糖尿病心肌病組、干預(yù)組(Ⅱ相酶誘導(dǎo)劑CPDT500umol/kg/d)。持續(xù)喂以高糖高脂飼料，CPDT持

3、續(xù)給藥14天，結(jié)束實(shí)驗(yàn)。2、心臟采血測定空腹血糖。3、心臟采血后迅速取出心臟，用等滲鹽水洗凈，濾紙吸干，稱心臟重量，計(jì)算左心室重量指數(shù)。4、HE染色:取左心室游離壁組織，常規(guī)固定，石蠟包埋，觀察心肌細(xì)胞大小及心肌纖維化情況。5、透射電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu)的變化。6、TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)。7、Western blot法檢測心肌組織HO-1、MDA，Nrf2表達(dá)。8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)

4、準(zhǔn)差((x)±s)表示，組間比較采用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，相關(guān)指標(biāo)之間采用直線相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1、大鼠一般情況指標(biāo):(1)血糖:糖尿病組與干預(yù)組較正常組血糖升高(P＜0.01)。(2)體重:糖尿病組與干預(yù)組較正常組體重明顯減輕(P＜0.01)。(3)心體比及左心室重量指數(shù):糖尿病組較正常組心體比及左心室重量指數(shù)增加(P＜0.01)，干預(yù)劑組較糖尿病組減少(P＜0.01)。2、

5、HE染色:糖尿病組與干預(yù)組較正常組心肌細(xì)胞體積增大(P＜0.01)。3、TUNEL:糖尿病組比正常組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增加(P＜0.01)，干預(yù)劑組比糖尿病組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)減少(P＜0.01)。4、電鏡:正常組心肌細(xì)胞形態(tài)正常，肌絲豐富、排列緊密，線粒體形態(tài)正常;糖尿病組心肌細(xì)胞肥大，心肌稀疏，部分有斷裂甚至溶解，線粒體腫脹。5、Western blot:糖尿病組較正常組HO-1表達(dá)減低(P＜0.01)，干預(yù)組較糖尿病組表達(dá)升高(P＜0