小膠質(zhì)細(xì)胞在胰島素作用下功能變化及機(jī)制.pdf

1、目的:觀察小膠質(zhì)細(xì)胞及高TrkA表達(dá)的小膠質(zhì)細(xì)胞在不同濃度胰島素作用下功能的變化及其可能機(jī)制，探討TrkA蛋白高表達(dá)對小膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響。
　　方法:用BV2、PC12細(xì)胞株分別代表小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。以BV2細(xì)胞、高TrkA表達(dá)的BV2（TrkA+BV2）細(xì)胞作為研究對象，用PC12細(xì)胞存活率反映二者在不同濃度胰島素作用下的功能。將0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml的胰島素分別加入BV

2、2和TrkA+BV2細(xì)胞，培養(yǎng)20h后收集上清液，以備培養(yǎng)PC12細(xì)胞。按上清液的不同，將PC12細(xì)胞分為:BV2細(xì)胞處理組和TrkA+BV2細(xì)胞處理組，前者加入收集好的BV2細(xì)胞上清液，后者加入TrkA+BV2細(xì)胞上清液。繼續(xù)培養(yǎng)PC12細(xì)胞1h，再加入H2O2損傷，用MTT法檢測PC12細(xì)胞存活率。將TrkA+BV2細(xì)胞處理組的PC12細(xì)胞存活率與同等條件下的BV2細(xì)胞處理組進(jìn)行對比，明確TrkA蛋白高表達(dá)對BV2細(xì)胞功能的影響。E

3、LISA法檢測不同濃度胰島素作用下BV2及TrkA+B V2細(xì)胞NGF、IL-1β的分泌量。
　　結(jié)果:1.當(dāng)胰島素濃度為0 ng/ml、10ng/ml、25ngml、50ng/ml、75ng/ml時，BV2細(xì)胞處理組的PC12細(xì)胞存活率依次為48.26±0.70％、52.02±0.67％、57.30±0.91％、60.71±1.51％、69.25±1.79％。對應(yīng)胰島素濃度下，TrkA+BV2細(xì)胞處理組的PC12細(xì)胞存活率依次為

4、49.34±1.33％、62.06±0.70％、68.25±1.56％、73.19±2.38％、81.87±1.28％。PC12細(xì)胞存活率均隨胰島素濃度的增加而逐漸增高，單因素方差分析有統(tǒng)計學(xué)意義，組內(nèi)兩兩比較，差異具有顯著性(P＜0.01)。與同等條件下的BV2細(xì)胞處理組比較（除0 ng/ml濃度外），TrkA+BV2細(xì)胞處理組的PC12細(xì)胞存活率均顯著升高(P＜0.01)。
　　2.BV2與TrkA+BV2細(xì)胞NGF分泌量均隨

5、胰島素濃度的升高而逐漸增多，其值分別為532.17±8.52ng/L VS568.27±7.43ng/L(10ng/ml胰島素)、569.18±9.36ng/LVS593.17±11.10ng/L(25ng/ml胰島素)、599.24±15.34ng/L VS636.40±10.75ng/L(50ng/ml胰島素)、635.06±12.35ng/L VS678.72±13.46ng/L(75ng/ml胰島素)，單因素方差分析有統(tǒng)計學(xué)意義

6、，組內(nèi)兩兩比較，差異具有顯著性(P＜0.05);與同等條件下的BV2細(xì)胞進(jìn)行對比，TrkA+BV2細(xì)胞NGF的分泌量均顯著升高(P＜0.05)。BV2與TrkA+B V2細(xì)胞IL-1β分泌量隨胰島素濃度的升高而逐漸減少，其量分別為17.77±0.58ng/L VS17.87±0.66ng/L(10ng/ml胰島素)、14.15±0.69ng/L VS14.80±0.41 ng/L(25ng/ml胰島素)、13.67±0.89ng/L V

7、S14.11±0.10ng/L(50ng/ml胰島素)、11.53±1.54ng/L VS11.76±0.84ng/L(75ng/ml胰島素)，單因素方差分析有統(tǒng)計學(xué)意義，除25ng/ml與50ng/ml的分泌量比較無差異外(P＞0.05)，剩余組內(nèi)兩兩比較差異均具有顯著性(P＜0.05); TrkA+BV2細(xì)胞與同等條件下的BV2細(xì)胞進(jìn)行對比，IL-1β的分泌量均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.小膠質(zhì)細(xì)胞在一定范圍