橋本甲狀腺炎患者IncRNA-TMEVPG1變化及對(duì)Th1細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　通過研究橋本甲狀腺炎患者(Hashimoto's thyroiditis，HT)外周血和甲狀腺組織中Th1細(xì)胞及相關(guān)因子表達(dá)水平，了解Th1細(xì)胞及相關(guān)因子在HT發(fā)病中的作用;研究長鏈非編碼RNA(lncRNA)-TMEVPG1在HT患者外周血和甲狀腺組織中的變化，探討TMEVPG1對(duì)Th1細(xì)胞的影響，分析HT患者體內(nèi)TMEVPG1與Th1細(xì)胞、自身抗體水平的關(guān)系，初步揭示TMEVPG1在橋本甲狀腺炎發(fā)病過程中的作用，為

2、HT的診治提供新思路。
　　方法:
　　1、采用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測(cè)HT患者與健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）中Th1細(xì)胞(CD3+CD8-IFN-γ+T細(xì)胞)比例，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-timepolymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測(cè)HT患者與

3、健康志愿者PBMCs中T-bet和IFNG mRNA表達(dá)水平，分析患者PBMCs中T-bet mRNA表達(dá)水平與Th1細(xì)胞比例相關(guān)性，通過qRT-PCR檢測(cè)HT患者與單純性甲狀腺腫患者甲狀腺組織中T-bet和IFNG mRNA表達(dá)水平。
　　2、通過qRT-PCR檢測(cè)HT患者與健康志愿者PBMCs中TMEVPG1表達(dá)情況，分析HT患者PBMCs中TMEVPG1與Th1細(xì)胞比例及T-bet、IFNG mRNA相關(guān)性，通過qRT-PC

4、R檢測(cè)HT患者與單純性甲狀腺腫患者甲狀腺組織中TMEVPG1表達(dá)情況，分析HT患者甲狀腺組織中TMEVPG1與T-bet、IFNGmRNA相關(guān)性。
　　3、磁珠分選健康志愿者外周血CD4+T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染TMEVPG1 siRNA或NC(negative control)，采用qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后TMEVPG1和IFNG mRNA水平變化，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后CD4+ IFN-γ+T細(xì)胞比例變化。
　　4、應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免

5、疫分析法(chemiluminescence immunoassay，CIA)檢測(cè)HT患者抗甲狀腺球蛋白抗體(anti-thyroglobulin antibody，TgAb)和抗甲狀腺過氧化物酶抗體(anti-thyroperoxidase antibody，TPOAb)水平，分析患者PBMCs中TMEVPG1與自身抗體水平的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1、與健康對(duì)照組相比，橋本甲狀腺炎患者PBMCs中Th1細(xì)胞比例顯著增高

6、[(17.96±6.51)％vs(29.14±12.47)％，P＜0.001]。HT患者PBMCs中Th1細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA水平顯著高于健康志愿者(1.00±0.60 vs0.55±0.23，P＜0.01)。HT患者PBMCs中Th1細(xì)胞特征性細(xì)胞因子IFNG mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于健康志愿者(1.49±1.56 vs0.53±0.33，P＜0.01)。HT患者PBMCs中T-bet mRNA表達(dá)水平與Th1細(xì)胞

7、比例存在顯著正相關(guān)(r=0.4590，P=0.0140)。此外，HT患者甲狀腺組織中T-bet mRNA表達(dá)水平顯著高于單純性甲狀腺腫患者(0.34±0.35 vs0.08±0.04, P＜0.05)，并且HT患者甲狀腺組織中IFNG mRNA亦顯著高于單純性甲狀腺腫患者(0.73±0.80 vs0.05±0.04，P＜0.01)。
　　2、橋本甲狀腺炎患者PBMCs中TMEVPG1表達(dá)水平明顯高于健康志愿者(2.68±1.82

8、vs0.84±0.80，P＜0.001)，且與Th1細(xì)胞比例存在顯著正相關(guān)(r=0.5010，P=0.0066)，與T-bet mRNA(r=0.6138, P=0.0005)和IFNG mRNA(r=0.4463,P=0.0173)表達(dá)水平亦存在正相關(guān)。
　　3、與單純性甲狀腺腫患者相比，HT患者甲狀腺組織中TMEVPG1相對(duì)表達(dá)量明顯增高(0.05±0.05 vs0.97±1.16，P＜0.01)。HT患者甲狀腺組織中TMEV

9、PG1與T-bet mRNA(r=0.8652, P=0.0012)和IFNG mRNA(r=0.9398, P＜0.0001)表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。
　　4、與轉(zhuǎn)染NC相比，轉(zhuǎn)染TMEVPG1 siRNA的健康人CD4+T細(xì)胞中TMEVPG1和IFNG mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低，CD4+ IFN-γ+T細(xì)胞比例明顯減少。
　　5、HT患者PBMCs中TMEVPG1表達(dá)水平與TgAb(r=0.4762，P=0.0104)和

10、TPOAb(r=0.3789，P=0.0468)水平呈顯著正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1、HT患者體內(nèi)Th1細(xì)胞比例及相關(guān)因子水平增高，且T-bet mRNA表達(dá)水平與Th1細(xì)胞比例呈顯著正相關(guān)，提示Th1細(xì)胞及相關(guān)因子在HT的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。
　　2、HT患者體內(nèi)TMEVPG1表達(dá)水平明顯高于健康志愿者，且與Th1細(xì)胞比例、特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA及特征性細(xì)胞因子IFNG mRNA表達(dá)水平均存在顯著正