慢性蕁麻疹患者PBMC中TLRs和DC-SIGN及淋巴細(xì)胞亞群分布的實驗研究.pdf

1、慢性蕁麻疹(CU)是一種常見的皮膚病,發(fā)病率高,瘙癢難耐,久治不愈,反復(fù)發(fā)作可達(dá)數(shù)月甚至數(shù)年以上,嚴(yán)重影響了病人的生活質(zhì)量?，F(xiàn)有的治療手段一般是避免誘因,控制癥狀,需要長期口服用藥,總體療效不盡如人意。目前,CU發(fā)病機(jī)制還不十分清楚,因此,探索CU的發(fā)病機(jī)制尤其是免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制顯得尤為重要。
　　以往的研究結(jié)果顯示,早期CU患者的促炎性細(xì)胞因子分泌的增加,提示CU患者存在固有免疫功能的異常。固有免疫系統(tǒng)通過模式識別受體(PRR)來

2、識別病原體相關(guān)模式分子(PAMPs)和機(jī)體組織損傷相關(guān)分子模式(DAMPs),是人體的第一道防線。迄今為止,研究最深入的PRR是Toll樣受體(TLRs),TLRs識別配體后誘發(fā)固有免疫反應(yīng),DC-SIGN屬于C型凝集素受體(CLRs)家族,由于DC-SIGN與TLRs之間存在交叉對話,可誘導(dǎo)免疫耐受而備受關(guān)注。TLRs在誘導(dǎo)固有免疫的同時,進(jìn)一步調(diào)節(jié)獲得性免疫反應(yīng)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn),CU患者淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成比與癥狀的嚴(yán)重程度之間的相關(guān)性

3、,提示CU患者存在獲得性免疫功能的異常。目前對CU免疫學(xué)機(jī)制缺乏系統(tǒng)的研究,尤其缺乏對固有免疫的研究。
　　本研究通過檢測CU患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)TLR-2、7、9和DC-SIGN mRNA和蛋白表達(dá),同時檢測CU患者外周血T、B細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群的構(gòu)成比變化,探討固有免疫和獲得性在CU發(fā)病機(jī)制中的作用,為進(jìn)一步CU的治療提供實驗依據(jù)。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)后進(jìn)行該試驗。主要研究內(nèi)容和結(jié)果包括以下兩部分:
　　1

4、.采集CU患者20例與正常對照組20例外周血,EDTA抗凝。采用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC,進(jìn)行免疫熒光染色,流式細(xì)胞術(shù)檢測PBMC TLR-2、7、9和DC-SIGN蛋白表達(dá);其余PBMC采用Trizol提取總RNA,采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測 TLR-2、7、9和DC-SIGN mRNA表達(dá)。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對照組相比,CU患者PBMC的DC-SIGN mRNA和蛋白表達(dá)顯著降低(分別為p<0.01和p<0.05);

5、TLR2和TLR9 mRNA表達(dá)呈升高趨勢,TLR7表達(dá)呈降低趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。CU患者PBMC的TLR2蛋白表達(dá)水平增高(p<0.05);TLR7、TLR9蛋白在CU組病人中的表達(dá)水平有升高趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05).
　　2.采集CU患者20例與正常對照組20例外周血,EDTA抗凝。采用免疫熒光染色,流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+T細(xì)胞、B細(xì)胞構(gòu)成比;同時檢測T淋

6、巴細(xì)胞亞群Th1、Th2、Th17、Treg細(xì)胞所占比例。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對照組相比CU患者外周血B細(xì)胞構(gòu)成比低于正常組(p<0.05);CU患者外周血CD8+T細(xì)胞構(gòu)成比增高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05);CU患者外周血CD4/CD8比值有降低的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05);CU患者外周血Th2細(xì)胞所占比例有升高的趨勢,Th17所占比例有降低的趨勢,但無統(tǒng)計學(xué)差異;Th1和Treg細(xì)胞所占比例無明顯變化。
　　綜上

7、所述,本研究采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和流式細(xì)胞技術(shù),檢測和分析了CU患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)TLR-2、7、9和DC-SIGN mRNA和蛋白表達(dá),同時檢測CU患者外周血T、B細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞亞群的構(gòu)成比。結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常對照組相比,CU患者TLR2蛋白表達(dá)上調(diào),DC-SIGN mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào),TLR2、9 mRNA和TLR7、9蛋白表達(dá)呈升高趨勢,TLR7 mRNA表達(dá)呈降低趨勢,提示TLR2誘導(dǎo)的固有免疫反