大豆1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合酶基因啟動子的克隆與分析.pdf

1、乙烯作為一種植物激素，對植物種子萌發(fā)、生長發(fā)育、衰老、果實成熟、性別決定等有廣泛的影響，同時與逆境脅迫如機械傷害、冷害、漬水、病原菌入侵等方面有關(guān)，并參與植物細胞的程序性死亡。ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylate，1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸)合酶是乙烯合成途徑中的限速酶，它在植物組織內(nèi)活性的大小往往決定著乙烯產(chǎn)生的速率，因此ACC合酶基因的調(diào)控對于乙烯的體內(nèi)合成是至關(guān)重要的，而目前有關(guān)大豆ACC合酶基

2、因啟動子的研究尚未見報道，本研究分離得到了大豆ACC合酶基因啟動子，并對其進行初步的功能分析。 根據(jù)已報道的大豆ACC合酶基因序列(GenBank Accession No:dq273840)設(shè)計三個基因特異的反向引物CTA798 sp1，CTA798 sp2，CTA798 sp3，分別與4個簡并引物配對，通過熱不對稱PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)擴增，獲得了該基因

3、上游約600bp的序列。利用5'-cDNA末端快速擴增(5’Rapid Amplification of cDNA ENDs,5'-RACE)實驗，確定轉(zhuǎn)錄起始位點(TTS)位于起始密碼子上游164 bp處，由此獲得了大豆ACC合酶基因上游長約328bp的啟動子序列。用PLACE和PLANTCARE軟件分析此序列，發(fā)現(xiàn)該序列具有啟動子的基本元件TATA-box和CAAT-box；此外發(fā)現(xiàn)三個脅迫誘導(dǎo)元件：光應(yīng)答元件Boxl，Box4和刺