胰液反流對(duì)急性肝損傷影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：胰腺和膽道的某些疾病常同時(shí)或先后發(fā)生于同一個(gè)體，這種“胰膽同病”現(xiàn)象越來(lái)越受到廣泛的重視。目前許多動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床資料證實(shí)胰腺與膽系疾病之間存在著內(nèi)在聯(lián)系，這與胰管、膽管聯(lián)合部形成共同通道開口于十二指腸壺腹部有關(guān)，當(dāng)共同通道過(guò)長(zhǎng)形成胰膽合流異常(PBM)或其開口處因結(jié)石、腫物、瘢痕或壺腹括約肌痙攣而阻塞時(shí)，胰液、膽汁之間則會(huì)發(fā)生相互混流和反流。近年來(lái)對(duì)由于存在胰膽合流異常胰液反流所致的膽系慢性病變及膽道梗阻后致胰液、膽汁排泄不暢所引

2、起的膽源性胰腺炎作了系統(tǒng)研究與報(bào)道。且有大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究對(duì)膽道梗阻時(shí)肝臟損傷的機(jī)制、病理生理改變作了比較系統(tǒng)詳盡的論述，同時(shí)也證實(shí)了膽道梗阻時(shí)反映肝功能的多項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)及肝臟病理形態(tài)有不同程度的變化。而對(duì)于因胰膽共同通道阻塞后胰液反流入膽道引起急性膽囊炎同時(shí)發(fā)生的急性肝損傷少見詳盡報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)采用向家兔膽管內(nèi)注入胰酶的方式模擬制備胰膽共同通道阻塞致胰液反流時(shí)發(fā)生急性膽囊炎和肝損傷的動(dòng)物模型，觀察胰液反流入膽道引發(fā)急性膽囊

3、炎同時(shí)血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、總膽紅素(TBIL)等反映肝功能的各項(xiàng)指標(biāo)，膽囊膽汁淀粉酶(AMY)，血清、肝組織一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及肝臟病理形態(tài)的變化，進(jìn)一步研究胰液反流對(duì)急性肝損傷的影響以及NO在急性肝損傷中的作用，為研究發(fā)生膽道梗阻胰液反流時(shí)引起的急性肝損傷機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法：選擇健康家兔，雌雄不限共45只，體重2.0

4、-2.5kg/只(購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，隨機(jī)分為3組，假手術(shù)組(SO)，單純膽道梗阻組(BDL)，膽道梗阻并注入胰酶組(M)，所有家兔手術(shù)前禁食過(guò)夜，自由飲水。3％戊巴比妥鈉按35mg/kg耳緣靜脈麻醉，無(wú)菌條件下取腹部正中切口(3cm)開腹，觀察肝臟及膽囊大體形態(tài)，尋找膽總管。膽道梗阻并注入胰酶組仔細(xì)鈍性剝離膽總管，結(jié)扎近腸端，以兒科靜脈留置針穿刺成功后，見黃綠色膽汁流出，以1ml注射器抽出0.2ml膽汁，用微量槍抽取50U

5、/ml的胰液0.2ml注入1ml的注射器中，以每分鐘0.1ml的速度注入膽總管，觀察無(wú)膽汁流出后，穿刺點(diǎn)近肝端結(jié)扎膽總管：?jiǎn)渭兡懙拦Ｗ杞M仔細(xì)鈍性剝離膽總管并予以結(jié)扎；假手術(shù)組只仔細(xì)剝離膽總管。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)后3天處死，觀察肝臟、膽囊大體形態(tài)，留取膽囊膽汁2ml進(jìn)行淀粉酶檢測(cè)，并取血標(biāo)本檢測(cè)ALT、AST、AST、ALP、GGT、TBIL、NO、NOS等指標(biāo)，各組均取適量肝臟、膽囊組織，秤取肝臟組織100mg研磨成勻漿，取上清液于-20℃

6、保存用于測(cè)NO、NOS，其余肝臟組織以及膽囊組織置于10％中性甲醛中以備制石蠟切片，行HE染色，光鏡下(放大400倍)觀察。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS FORWINDOWS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所得結(jié)果，計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-X±s)表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.肝臟、膽囊組織病理學(xué)變化 1.1假手術(shù)組肉眼觀肝臟紅潤(rùn)無(wú)腫脹，被膜光滑；膽囊色澤稍暗

7、，粘膜完整，與周圍組織無(wú)粘連。光鏡下觀察肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)胞無(wú)腫脹、變性和壞死；膽囊粘膜上皮完好，各層無(wú)充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 1.2單純膽道梗阻組肉眼觀肝臟呈暗紅色，明顯腫脹，被膜光滑;膽囊色澤暗，體積增大，表面無(wú)潰瘍、膿苔。光鏡下觀察肝臟組織變化表現(xiàn)為肝細(xì)胞濁腫、空泡變性、散在小灶性或片狀壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)；膽囊粘膜上皮輕度脫落，固有膜、肌層、漿膜充血、水腫，并有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 1.3膽道梗阻并注入

8、胰酶組肉眼觀肝臟呈暗紅色，明顯腫脹，少數(shù)動(dòng)物被膜可見散在的膿白苔；膽囊色澤晦暗，較梗阻組增大，膽囊底部有大小不一膿苔。光鏡下觀察肝臟組織表現(xiàn)為肝細(xì)胞濁腫、空泡變性、灶性或片狀壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)，少數(shù)動(dòng)物肝臟組織空泡變性、壞死面積較大：膽囊粘膜上皮重度脫落，甚至消失，粘膜、固有膜、肌層、漿膜均可見高度水腫、充血，可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 2.血清ALT、AST、ALP、TBIL、GGT的變化 2.1 ALT膽道梗阻并注入胰酶組、

9、單純膽道梗阻組較假手術(shù)組血清ALT明顯升高，各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.2 AST膽道梗阻并注入胰酶組、單純膽道梗阻組較假手術(shù)組血清AST明顯升高，各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.3 ALP、TBIL、GGT膽道梗阻并注入胰酶組與單純膽道梗阻組血清ALP、TBIL、GGT均明顯升高，以膽道梗阻并注入胰酶組升高較為明顯，但兩組間比較P值均大于0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與假手術(shù)組比較有顯著差異。 3.血清、肝組織N

10、O、NOS的變化膽道梗阻并注入胰酶組及單純膽道梗阻組血清及肝組織NO、NOS均明顯升高，兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與假手術(shù)組比較有顯著性差異。 4.膽囊膽汁淀粉酶的變化膽道梗阻并注入胰酶組及單純膽道梗阻組與假手術(shù)組比較膽囊膽汁淀粉酶明顯升高，有顯著差異；單純膽道梗阻組及假手術(shù)組之間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.膽道梗阻并注入胰酶組血清ALT、AST較單純膽道梗阻組升高，表明胰液反流可加重肝損傷。 2.膽

11、道梗阻后引起急性膽囊炎的同時(shí)發(fā)生肝損傷。但膽道梗阻并注入胰酶組與單純膽道梗阻組比較血清ALP、GGT、TBIL各指標(biāo)變化無(wú)顯著差異，說(shuō)明在發(fā)病早期膽道梗阻、膽汁淤積可能是引起肝損傷的主要原因，盡早解除膽道梗阻是防治肝損傷的主要治療手段。隨著胰液反流時(shí)間的增加是否會(huì)使肝損傷明顯加重尚待進(jìn)一步研究。 3.膽道梗阻并注入胰酶組及單純膽道梗阻組肝組織、血清中NO、NOS與假手術(shù)組比較明顯升高，說(shuō)明NO、NOS參與肝損傷過(guò)程，并起到重要作