耐鹽大豆培育分子策略的探討.pdf

1、大豆是主要的油料作物之一,而土壤鹽漬化和線蟲(chóng)病嚴(yán)重抑制了大豆的生長(zhǎng)和發(fā)育,因此,培育耐鹽抗線蟲(chóng)大豆新品種對(duì)提高大豆產(chǎn)量無(wú)疑將產(chǎn)生重要影響。本文的目的是利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆胚尖高效遺傳轉(zhuǎn)化方法,將分別來(lái)自三種耐鹽性不同的植物的與陰離子清除有關(guān)的甲基轉(zhuǎn)移酶基因?qū)氪蠖怪?以期為植物基因工程探索出一條新途徑,同時(shí)為大豆的遺傳育種提供新資料。 ⑴對(duì)大豆的滅菌方法、外植體的優(yōu)化、分化和拔高培養(yǎng)基的優(yōu)化、生根培養(yǎng)基及生根方法等進(jìn)行了探索,以

2、建立大豆胚尖高效再生體系；對(duì)大豆遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中的重要因素如篩選壓、菌液濃度、浸染時(shí)間、農(nóng)桿菌抑制劑的使用等進(jìn)行了研究：分別將來(lái)自擬南芥、鹽芥和鹽地堿蓬的甲基轉(zhuǎn)移酶基因MCT利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法導(dǎo)入大豆中,并利用PCR、RT-PCR、Southern雜交等分子手段對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了檢測(cè)。 ⑵建立了大豆胚尖高效再生體系：成熟大豆種子浸泡24h后,用1:1的1.2％的次氯酸鈉和0.1％的升汞混合液處理大豆10min,收集胚尖并轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)分

3、化培養(yǎng)基MS+0.08 mg/L TDZ,30d后將長(zhǎng)有叢生芽的胚尖轉(zhuǎn)入拔高培養(yǎng)基MS+2.0mg/L KT+0.2 mg/L NAA中,20d后切取苗高大于5cm的植株,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/2MS+0.5mg/LNAA中,30d后待根長(zhǎng)到3-4cm后移栽到培養(yǎng)土中；優(yōu)化了大豆胚尖遺傳轉(zhuǎn)化體系：卡那霉素選擇濃度為90mg/L,菌液濃度為OD600=0.6,浸染時(shí)間為12h,可用氨芐青霉素作為農(nóng)桿菌的抑制劑；AtMCT、ThMCT和SsMC