HPVL1多肽抗體檢測HPV感染能力及確證多肽抗血清中和HPV16能力實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本課題組前期的研究結果表明:由課題組發(fā)現并已成功申請專利的人乳頭瘤病毒(HPV)主要衣殼蛋白L1C-末端共同保守序列多肽,能夠誘導動物產生的抗血清,對多種型別HPVL1具有交叉的免疫反應性,并且對多種HPV型別具有檢測能力和一定的中和HPV病毒能力。本課題主要任務就是進一步評價該多肽抗體檢測HPV感染能力和多肽抗血清中和HPV病毒能力情況,目的就是為HPV檢測試劑盒和HPV預防性疫苗的開發(fā)、研究做理論基礎和前期工作。本課題的研究內容主要

2、包括以下兩大部分:
  第一部分:HPVL1多肽抗體評價HPV感染檢測能力
  目的:進一步確證HPVL1多肽抗體是否具有檢測HPV感染能力,評估其檢測效價。方法:1)收集臨床宮頸脫落細胞標本,一式兩份;2)一份標本采用商用的潮州“凱普HPV分型檢測試劑盒”進行HPV型別鑒定,統(tǒng)計HPV感染的檢出率;3)對相同的另一份標本以本課題組的HPVL1多肽抗血清為探針進行酶聯免疫吸附(ELISA)實驗,確定標本中病毒L1蛋白的存在與

3、否,計算由本方法檢測HPV感染率;4)采用統(tǒng)計學軟件,比較分析以上兩種檢查方法檢測HPV的能力效價。
  結果:1)凱普試劑盒檢測308例臨床標本,陰性256例,陰性率為83.11%;陽性52例,陽性率為16.89%。其中HPV6、18各2例, HPV11有4例,HPV16有11例, HPV31、33、39、59、66、68、CP8304各有1例,HPV52有5例, HPV53有3例, HPV58有6例,HPV混合型共有12例。H

4、PV感染的型別中,HPV16、52和HPV58感染的比率均較高,分別占總有感染標本的20%、16%、14%。2)ELISA檢測308例臨床標本,共檢出陽性48例,陽性率為15.58%,陰性標本260例,陰性率為84.42%。3)凱普和ELISA兩種方法檢測HPV陽性例數,進行t檢驗,兩種檢測方法陽性率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。4)52例凱普試劑盒檢測陽性的標本中,ELISA檢測只有42例為陽性,其中HPV11有2例,HPV16有1例

5、,HPV39、52、53、58、68各有1例,混合型有2例用ELISA方法檢測為陰性。凱普檢測256例陰性標本中,ELISA檢測共有250例為陰性,陽性例數6例。5)凱普和ELISA兩種方法檢測同時為陽性的標本有42例,同時為陰性的標本有250例,凱普陽性、ELISA陰性標本10例,凱普陰性、ELISA陽性標本6例,結果進行X2檢驗,兩種方法陽性率無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論:1)用ELISA方法檢測HPVL1蛋白的表達,能夠確定

6、是否有HPV的感染,與凱普HPV分型試劑盒檢測HPV感染具有相同的檢測效果;2)本課題組制備的HPVL1多肽抗體對多種型別HPVL1具有廣譜反應能力和良好檢測能力。
  第二部分:HPVL1多肽抗血清中和HPV16能力確證
  目的:以HPV16作為研究的靶物質,判斷該序列多肽抗血清是否具有中和HPV病毒的作用,判斷是否具有針對HPV感染的免疫保護潛能,從而進一步確證多肽血清中和能力的多樣性,為HPV疫苗的開發(fā)、研究做理論基

7、礎。
  方法:1)收集經過臨床病理診斷的宮頸癌標本,PCR法對其進行HPV分型;2)通過對宮頸癌組織進行勻漿、離心、濃縮,微孔濾膜過濾除菌后,提取HPV16病毒混懸液;3)將提取的病毒混懸液與倍比稀釋后的多肽抗血清共孵育中和后,感染單層培養(yǎng)的HaCat細胞,用PCR方法檢測感染后HaCat細胞中是否有HPV16-DNA的存在;4)用ELISA法檢測感染后HaCat細胞HPVL1蛋白的表達差異情況,判定HPV L1多肽抗血清是否可

8、以阻斷HPV16對HaCat上皮細胞的感染,從而間接反應多肽抗血清中和HPV16的能力。
  結果:1)提取宮頸癌病變組織細胞的DNA,進行PCR產物經電泳,在凝膠206bp處(HPV16特異性區(qū)間)呈陽性條帶;2)粗提的HPV病毒感染正常的HaCat細胞,其細胞DNA提取物的PCR產物經電泳,在凝膠206bp處呈陽性條帶;3)HPV病毒與不同稀釋濃度的多肽抗血清中和后感染HaCat細胞,提取細胞的蛋白進行ELISA檢測HPVL1

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