高親和力IgE受體α鏈基因克隆、表達(dá)及自身免疫性慢性蕁麻疹發(fā)病機(jī)制的研究.pdf

1、制備出可作為檢測(cè)抗原的可溶性FcεRⅠα蛋白,建立一種簡(jiǎn)便、可靠的檢測(cè)抗Fc￡RⅠα自身抗體的方法.了解慢性蕁麻疹患者中自身免疫性慢性蕁麻疹的比例及抗Fc￡RⅠα自身抗體的陽(yáng)性率,研究慢性蕁麻疹患者血清中組胺釋放活性及其與抗FcεRⅠα自身抗體的關(guān)系;分析自身免疫性慢性蕁麻疹的臨床特點(diǎn)和嗜酸細(xì)胞活化情況,進(jìn)一步探討自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病機(jī)制.方法:應(yīng)用分子克隆和DNA重組技術(shù),通過皮膚組織中總RNA的提取、RT-PCR擴(kuò)增、重組質(zhì)粒

2、構(gòu)建、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化及重組子篩選鑒定,對(duì)FcεRⅠα基因進(jìn)行克隆,并作測(cè)序和序列對(duì)比分析;繼而通過將目的片段與高效表達(dá)載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入表達(dá)宿主菌,誘導(dǎo)表達(dá)并純化Fc￡RⅠα融合蛋白.在自體血清皮膚試驗(yàn)(ASST)的基礎(chǔ)上,通過肥大細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)檢測(cè)慢性蕁麻疹患者血清組胺釋放活性因子.以Fc￡RⅠα融合蛋白為抗原,用ELISA和免疫印跡法檢測(cè)慢性蕁麻疹患者血清中抗Fc￡RⅠα自身抗體,并通過抗Fc￡RⅠα自身抗體對(duì)組胺釋放活性

3、的影響證實(shí)其功能性.同時(shí),進(jìn)行臨床資料的采集、分析,放免法測(cè)定抗甲狀腺球蛋白抗體(TG-AB)和抗甲狀腺微粒體抗體(TM-AB),Immulite化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定血清總IgE(T-IgE)和ECP水平,計(jì)數(shù)外周血EOS.結(jié)論:Fc￡RⅠα基因的克隆、表達(dá)成功,制備出可溶性Fc￡RⅠα蛋白,為抗Fc￡RⅠα抗體的檢測(cè)及自身免疫性慢性蕁麻疹發(fā)病機(jī)制的研究提供了條件.部分慢性蕁麻疹患者血清中存在組胺釋放活性因子,這種組胺釋放活性因子與其血

4、清中的抗Fc￡RⅠα自身抗體有關(guān),抗Fc￡RⅠα自身抗體可直接活化肥大細(xì)胞,釋放組胺等血管活性介質(zhì),引起蕁麻疹的發(fā)生.自身免疫性慢性蕁麻疹的臨床表現(xiàn)與一般的CIU有所不同,多表現(xiàn)為較嚴(yán)重的慢性蕁麻疹,并較易伴發(fā)其它自身免疫性疾病.非自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān),存在T淋巴細(xì)胞亞群的失衡,而自身免疫性慢性蕁麻疹的發(fā)病機(jī)制可能與此無關(guān).慢性蕁麻疹患者均有不同程度EOS的活化,而自身免疫性慢性蕁麻疹患者EOS活化更明顯,且血清