水稻抗稻瘟病相關(guān)基因的篩選及RNA沉默載體的構(gòu)建.pdf

1、稻瘟病嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量和質(zhì)量,是水稻生產(chǎn)中最重要的病害之一,我國稻瘟病在流行的年份,重病區(qū)一般減產(chǎn)10％-20％,嚴(yán)重的達(dá)40％-50％,局部田塊甚至顆粒無收。近年來,由于分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的快速發(fā)展,通過植物轉(zhuǎn)基因技術(shù),結(jié)合常規(guī)育種可以選育優(yōu)良轉(zhuǎn)基因水稻新品種。
　　 本研究室在以前的研究中將來自水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的hrf1基因利用根癌土壤桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因方

2、法將其導(dǎo)入粳稻品種R109得到了轉(zhuǎn)基因后代12-2。對已獲得的R109轉(zhuǎn)基因水稻在溫室和田間小區(qū)進(jìn)行抗性鑒定,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因系對稻瘟病多個小種抗性明顯提高,是一種廣譜意義上的抗性。轉(zhuǎn)基因系和出發(fā)植株間表現(xiàn)出的這種差異為后續(xù)研究提出了一個新的課題——差異表達(dá)基因的克隆及其功能驗(yàn)證。
　　 基因芯片(gene chip)是將大量的靶基因片段有序的、高密度的固定在玻璃、硅等載體上制作而成的?；虮磉_(dá)譜芯片是目前應(yīng)用最廣泛的基因芯片。本研究

3、在先前研究的基礎(chǔ)上,借助水稻表達(dá)譜芯片進(jìn)行高通量、大規(guī)模的分析、鑒定和篩選轉(zhuǎn)基因抗稻瘟病水稻與轉(zhuǎn)基因受體植株之間的差異表達(dá)基因,從中篩選到了92個差異表達(dá)顯著的基因,在這92個基因中,顯著上調(diào)的基因有70個,顯著下調(diào)的基因有22。我們從顯著上調(diào)的基因中選擇了23個作為候選基因,通過RT-PCR和Real time PCR驗(yàn)證最終確定了7個基因作為我們的目標(biāo)基因。
　　 針對通過芯片得到的差異表達(dá)基因,本文應(yīng)用Gateway技術(shù)進(jìn)