大黃素影響大鼠胃平滑肌細(xì)胞鈣敏感性調(diào)節(jié)機(jī)制的研究.pdf

1、　　目的：研究大黃素對G蛋白偶聯(lián)的鈣敏感性調(diào)節(jié)影響的機(jī)制。　　方法：用酶分解法分離Wistar大鼠胃平滑肌細(xì)胞。采用平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣鉗制技術(shù)使平滑肌細(xì)胞內(nèi)的游離鈣離子水平控制在某一特定水平。先觀察大黃素是否通過G蛋白偶聯(lián)發(fā)揮作用，將實驗分四組：①大黃素組；②大黃素+GDP類似物GDPβs組；③GDP類似物GDPβs組；④正常對照組。各組均分五個濃度梯度，大黃素組為1，5，10，50，100μmol/L；GDPβs組為10，50，100，

2、500，1000μmol/L；大黃素+GDPβs組為前兩組濃度相應(yīng)一一配伍而成。再觀察大黃素是否通過RhoA途徑發(fā)揮作用，將實驗分為兩組：加C3-transferase組和正常對照組。再用圖像分析系統(tǒng)測量平滑肌細(xì)胞的長度。采用Westernblotting分析大黃素引起RhoA在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)量的變化。采用激光掃描共聚焦顯微鏡和免疫熒光技術(shù)分析RhoA在細(xì)胞內(nèi)的時空分布變化?！　〗Y(jié)果：大黃素在平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子水平固定時劑量依賴