Cathepsin D在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其與腫瘤微血管生成的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:星形細(xì)胞瘤是起源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)和灰質(zhì)的星形細(xì)胞，是神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤，約占全部顱內(nèi)腫瘤的20％，占膠質(zhì)瘤的70％以上，其浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的特點(diǎn)是其復(fù)發(fā)的根源，腫瘤生長(zhǎng)的邊界不清致使手術(shù)全切除率低、復(fù)發(fā)率高，多數(shù)患者術(shù)后即使輔以放療、化療等聯(lián)合治療，預(yù)后仍然不佳，是目前神經(jīng)外科治療的難題。最重要的原因是對(duì)星形細(xì)胞瘤侵潤(rùn)及發(fā)展的機(jī)制尚不十分清楚，近年的研究表明其機(jī)制與腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)的降解密切相關(guān)；此外有實(shí)驗(yàn)研究表明實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)依

2、賴(lài)新生血管的形成，腫瘤內(nèi)新生血管形成與腫瘤增殖過(guò)程中產(chǎn)生和釋放的腫瘤血管形成因子有關(guān)，并且分化差的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤血管形成因子要多于高分化腫瘤。當(dāng)克隆性生長(zhǎng)的腫瘤長(zhǎng)大到幾個(gè)毫米大小時(shí)，其進(jìn)一步生長(zhǎng)則必須有新的血管形成。如果腫瘤不能血管化，其體積不會(huì)超過(guò)1-2mm3。 組織蛋白酶D(CathepsinD)是一種酸性溶酶體天冬氨酸蛋白酶.以低濃度存在幾乎任何細(xì)胞中，分子量大約為42000，分布廣泛。實(shí)驗(yàn)研究提示CathepsinD

3、的表達(dá)在乳腺腫瘤、胃腸道腫瘤、甲狀腺腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，其表達(dá)水平對(duì)腫瘤患者的預(yù)后也有重要影響。F-ⅧRag是一種糖蛋白，存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞weibel-paladal小體上，是具有特異性的內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物，是抗干擾較強(qiáng)的血管標(biāo)志物。目前國(guó)外對(duì)CathepsinD與膠質(zhì)瘤侵襲生長(zhǎng)的關(guān)系有所研究，但是有關(guān)CathepsinD在星型細(xì)胞瘤中的表達(dá)以及其表達(dá)程度對(duì)腫瘤血管生成的影響和對(duì)患者生存預(yù)后影響，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)有關(guān)報(bào)道。因此，本試

4、驗(yàn)采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)70例手術(shù)切除的星形細(xì)胞瘤標(biāo)本和10例正常腦組織標(biāo)本，目的在與探討CathepsinD的表達(dá)及其程度對(duì)腫瘤微血管生成的影響，結(jié)合臨床隨訪(fǎng)資料探究其對(duì)患者生存的影響。 材料和方法本實(shí)驗(yàn)分兩組：腫瘤組和正常對(duì)照組。腫瘤組選用廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院神經(jīng)外科2000年1月至2004年12月期間手術(shù)切除的腦星形細(xì)胞瘤標(biāo)本70例，男性45例，女性25例，年齡11歲-69歲，平均年齡39.53歲，幕上58例，幕下12例，

5、腫瘤最小1cm×1cm×2cm最大者4cm×6cm×6cm。按照WHO分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，星形細(xì)胞瘤Ⅰ級(jí)4例(毛細(xì)胞性星形細(xì)胞瘤)，星形細(xì)胞瘤Ⅱ級(jí)28例(彌漫型星形細(xì)胞瘤)，星形細(xì)胞瘤Ⅲ級(jí)26例(間變型星形細(xì)胞瘤)，星形細(xì)胞瘤Ⅳ級(jí)18例(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)。正常對(duì)照組10例標(biāo)本來(lái)自腦外傷內(nèi)減壓手術(shù)和高血壓腦出血手術(shù)中所取的正常腦組織。 3石蠟切片經(jīng)過(guò)脫蠟、水化、微波修復(fù)抗原等步驟后，分別使用抗CathepsinD多克隆抗體和抗F-ⅧRag抗體

6、，采用免疫組化S-P法檢測(cè)腫瘤組織中CathepsinD的表達(dá)水平，F(xiàn)-ⅧRag標(biāo)記腫瘤中的MVD。陽(yáng)性為血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕褐色，血管密度計(jì)量方法：采用Weidner血管計(jì)數(shù)法，在多功能顯微鏡200倍視野下，隨機(jī)計(jì)數(shù)20個(gè)視野，取其平均值，單位：個(gè)/mm2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.正常對(duì)照組CathepsinD的表達(dá)為陰性。 2.星形細(xì)胞瘤組中CathepsinD表達(dá)率為66％(46/70)，與正常對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、3.CathepsinD在腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率與星形細(xì)胞瘤的病理分級(jí)密切相關(guān)：低級(jí)別星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)率(46％)，陽(yáng)性細(xì)胞平均百分率為10.52±4.78％，顯著低于高級(jí)別星形細(xì)胞瘤中表達(dá)率(74％)，陽(yáng)性細(xì)胞平均百分率分別為39.76％±8.97％，56.28％±10.35％，各組對(duì)比有顯著差異(P＜0.01)。 4.星形細(xì)胞瘤組MVD35.21±12.07，正常腦組織組中平均微血管密10.40±3.17，兩組相比有顯著差

8、異(P＜0.01)，MVD值與星形細(xì)胞瘤CathepsinD表達(dá)呈正相關(guān)。 5.復(fù)發(fā)組及死亡組中星形細(xì)胞瘤CathepsinD陽(yáng)性表達(dá)率要高于未復(fù)發(fā)組和未死亡組，差異具有顯著性，高陽(yáng)性表達(dá)率是患者預(yù)后的高風(fēng)險(xiǎn)因素。 4結(jié)論1.星形細(xì)胞瘤中CathepsinD的表達(dá)可作為判斷星形細(xì)胞瘤惡性程度的重要生物學(xué)指標(biāo)。 2.CathepsinD的高表達(dá)與星形細(xì)胞瘤的血管生成密切相關(guān)。 3.CathepsinD是影響