后極性表型先天性白內(nèi)障的疾病相關(guān)候選基因定位.pdf

1、目的：先天性白內(nèi)障是兒童期視力缺損的首要病因之一。遺傳突變是最常見(jiàn)的致病因素。迄今為止,至少已發(fā)現(xiàn)與遺傳性的先天性白內(nèi)障相關(guān)的24個(gè)疾病相關(guān)基因。本實(shí)驗(yàn)對(duì)一個(gè)后極性表型的先天性白內(nèi)障家系進(jìn)行疾病相關(guān)候選基因定位。
　　 方法：本實(shí)驗(yàn)擬研究一四代的先天性白內(nèi)障大家系,共27人,患者9名。所有家系成員均接受病史調(diào)查和眼科檢查,包括視力、裂隙燈、散瞳眼底檢查等。抽取外周血樣本,提取基因組DNA。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增相關(guān)的候選基因

2、的編碼區(qū)及內(nèi)含子、外顯子交界區(qū)。擴(kuò)增產(chǎn)物雙向測(cè)序,并進(jìn)行序列分析。限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)進(jìn)一步驗(yàn)證突變。SIFT,PolyPhen,Align-GVGD三種計(jì)算法和疏水性分析預(yù)測(cè)突變對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能的影響。
　　 結(jié)果：裂隙燈下檢查該家系表型為后極性。分析家系圖,遺傳方式為常染色體顯性遺傳。測(cè)序結(jié)果發(fā)現(xiàn)CRYBB2基因編碼區(qū)一條等位基因的第5位堿基有C→T。改變,導(dǎo)致了第2位氨基酸由高保守的丙氨酸變?yōu)槔i氨酸(CRYB

3、B2-A2V)。該堿基改變于9名患者中共分離,而不存在于27名健康家系成員及100名健康者對(duì)照。RFLP證實(shí)該突變致使患者丟失一個(gè)HaeⅢ酶切位點(diǎn),而健康的家庭成員和100個(gè)健康者對(duì)照中未有改變。SIFT,PolyPhen,Align—GVGD分?jǐn)?shù)均提示A2V為可影響蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的有意義的突變。疏水性分析結(jié)果顯示A2V突變蛋白在突變區(qū)域的疏水性高于野生型β-晶狀體蛋白。
　　 結(jié)論：證實(shí)了CRYBB2基因第2外顯子中第5位堿