藏雞三個生長相關基因多態(tài)性研究暨Slc24a5基因與雞黑色素沉積關系初步研究.pdf

1、本論文由兩個部分組成:藏雞LEPR、IGF-2,MC4R基因SNP篩查及其與部分生長性狀關聯(lián)分析；Slc24a5基因與雞黑色素沉積關系初步研究。
　　 第一部分:藏雞是我國以原始飼養(yǎng)狀態(tài)保存下來的珍貴的高原地方雞種,適應長期低壓、缺氧、低溫惡劣環(huán)境的藏雞有著初生生長速度慢,成年個體小的顯著特點。一方面,藏雞同平原家禽一樣,生長發(fā)育主要受腦垂體生長軸以及采食能量代謝平衡系統(tǒng)控制；同時,低氧環(huán)境也對動物的生長有很大影響。為了揭示藏雞

2、獨特生長特點的遺傳機制,本研究以腦垂體生長軸上的IGF-2基因、控制能量代謝的MC4R基因,以及既參與調節(jié)能量代謝又與低氧適應相關的LEPR基因作為控制藏雞生長發(fā)育性狀主基因的候選基因,利用DNA混合池直接測序尋找潛在單核苷酸多態(tài)性(SNP),并采用PCR-RFLP,Mp-PCR,M-ASP方法對SNPs在藏雞和隱性白羽雞群體中進行檢測,分析這些基因的遺傳多樣性及突變位點在兩群體中基因型與等位基因分布趨勢。同時結合藏雞群體生長發(fā)育性狀,

3、研究了3個基因不同基因型對藏雞生長發(fā)育的可能影響。主要結果如下:
　　 1.對包含雞LEPR基因的leptin結合區(qū)(LBD)編碼區(qū)在內的第7至14外顯子進行了SNPs篩查,在該基因的第13外顯子和14外顯子上分別發(fā)現(xiàn)一個多態(tài)位點:A1869T和A1921G。其中對于A1921G,3種基因型頻率在2個品種間存在極顯著差異(P<0.01)。與藏雞部分生長性狀關聯(lián)分析表明,A1896T對藏雞的初生重、2周齡體重、7周齡體重、7周齡體

4、斜長都有顯著影響,A1921G對藏雞的初生重、初脛圍、2周齡體重、2周齡脛圍、4周齡體重均有顯著影響,其中含有G等位基因個體的初生生長性狀值顯著低于AA型個體。推測該位點氨基酸的改變(Thr641Ala)可能影響LEPR的LBD區(qū)與Leptin的結合。
　　 2.對IGF-2基因整個編碼區(qū)進行了SNP分析,在該基因第2外顯子上發(fā)現(xiàn)一個同義突變A126T。與藏雞部分生長性狀關聯(lián)分析表明,該位點對藏雞的2周齡脛圍有顯著影響,AA型個

5、體的第2周齡脛圍要顯著高于AG型與GG型個體。
　　 3.對MC4R基因整個編碼區(qū)進行了SNP分析,發(fā)現(xiàn)一個同義突變G315T,并且發(fā)現(xiàn)在隱性白羽雞中沒有T等位基因的存在,而在藏雞中存在3種基因型的個體。與藏雞部分生長性狀關聯(lián)分析結果表明,該位點對藏雞的7周齡體斜長和16周齡脛圍均有顯著影響。GG型個體的7周齡體斜長和16周齡脛圍均顯著大于其他GT型和TT型個體。
　　 第二部分:泰和烏骨雞是中國優(yōu)良的地方品種,除了有優(yōu)

6、質肉蛋品質外,烏骨雞與普通雞種最明顯的差異是烏骨雞體內含有大量黑色素,雖然國內外研究者對其體內黑色素的沉積分布規(guī)律進行了廣泛的研究,但對于控制其黑色素沉積規(guī)律的具體遺傳機制仍不清楚。最近,在斑馬魚和人中的研究表明,Slc24a5基因在控制膚色方面起重要作用,該基因可能通過其編碼區(qū)的堿基的突變而造成斑馬魚野生型和突變型以及黑人與白人膚色的差異。為了驗證雞Slc24a5基因是否以類似的機制控制雞膚色的變化,本研究以泰合烏骨雞為材料,以體內黑

7、色素沉積很少的尤溪麻雞作為對照,利用測序尋找在兩個雞種間是否存在Slc24a5基因編碼區(qū)堿基差異,并研究了Slc24a5基因在兩雞種多個組織的表達情況以分析該基因與黑色素沉積的可能關系。初步結果如下:
　　 1.比較了兩個雞種6個個體(每品種3個)Slc24a5基因編碼區(qū)的堿基序列。經分析,沒有找到在兩品種間特異的堿基差異。說明不同于人和斑馬魚中的研究,雞膚色差異并不是由該基因編碼區(qū)的堿基突變引起的。
　　 2.在兩雞種