新型雌激素受體ERa36高表達在MCF10A細胞信號轉導中的作用.pdf

1、乳腺癌是一種雌激素依賴性疾病,雌激素(Estrogen)通過與雌激素受體(EstrogenReceptor.ER)結合激活其信號通路,促進乳腺癌細胞的生長。雌激素的作用模式主要包括核啟動的雌激素信號轉導(NISS)和膜啟動的雌激素信號轉導(MISS)。
　　 Caveolin-1(Cav-1)在乳腺癌的發(fā)展中作為抑癌因子而備受關注。本室前期工作表明,人乳腺上皮細胞系MCF10A中沒有ERα36的表達,當Cav-1表達降低時,ER

2、α36表達明顯增加。這一發(fā)現(xiàn)不但使得克隆ERα36成為了可能,也為進一步研究ERα36的功能提供了很好的細胞模型。本文利用siRNA技術建立Cav-1低表達而ERα36高表達的穩(wěn)定傳代細胞模型MCF10ACE,采用基因芯片技術檢測ERa36高表達時雌激素信號通路基因表達譜,進而研究ERα36在雌激素激活的P13K/AKT信號通路中的作用及其與乳腺細胞轉化的關系,旨在探討Cav-1與ERa36相互作用調(diào)節(jié)膜起始的雌激素信號通路控制乳腺上皮

3、細胞轉化機制。
　　 結果:1)利用siRNA技術建立了Cav-1低表達而ERa36高表達的穩(wěn)定傳代細胞模型MCFl0AcE,Cav-1表達降低時可以以雌激素依賴性方式促進ERa36表達增加；2)利用MCF10ACE模型進行癌變相關基因和雌激素信號轉導相關基因的DNA微陣列(DNA super microarry)分析,發(fā)現(xiàn)當Cav-1基因下調(diào)時,雌激素相關信號通路的125個基因中10個基因明顯下調(diào),6個基因明顯上調(diào)；3)利用蛋

4、白質(zhì)免疫共沉淀和免疫印跡雜交技術研究Cav-1與ERa之間的相互作用及ERa介導的MAPK/ERK和P13K/AKT通路激活,發(fā)現(xiàn)Cav-1與ERa存在相互作用關系,Cav-1表達下調(diào)不但可以影響二者之間的相互作用能力,還可以激活ERa36的表達以及ERa36介導的Ca2+信號通路、MAPK/ERK和P13K/AKT通路的異?；罨?；4)利用ERa阻斷劑和P13K/AKT抑制劑處理MCF10ACE細胞,發(fā)現(xiàn)雌激素可以激活不同ERa亞型介導

5、的P13K/AKT通路和MEK/ERK信號通路,促進乳腺細胞增殖和轉化,但只有在Cav-1表達下調(diào)的細胞中ERa36表達最高,Cav-1表達減少使乳腺細胞對抑制劑的敏感性增加,這種作用是通過ERa與Cav-1的相互作用實現(xiàn)的。此外,P13K/AKT抑制劑能明顯抑制MCF10ACE細胞MAPK/ERK通路的激活。
　　 結論:Cav-1可能是調(diào)節(jié)膜起始的雌激素信號通路的一個潛在靶點,Cav-1低表達以雌激素依賴性方式促進ERa36