重金屬鎘生物檢測工程菌株的構建及應用.pdf

1、目的：以綠色熒光蛋白(GFP)基因為報告基因，和重金屬鎘特異性啟動子PcadA構建成基因工程重組體導入宿主菌，用于重金屬鎘的特異性檢測。 方法：采用聚合酶鏈式反應(PCR)從質粒pPcadA上擴增得到重金屬鎘離子特異性啟動子PcadA，以綠色熒光蛋白基因為報告基因，以大腸桿菌-枯草桿菌穿梭載體pNGFP構建了綠色熒光蛋白鎘離子誘導表達載體。以枯草芽孢桿菌1A751為宿主菌，采用感受態(tài)轉化法將表達載體導入1A751，成功構建鎘離子

2、檢測工程菌株。 分別采用不同種類的金屬離子對工程菌株進行誘導試驗，通過測定熒光強度考察工程菌株對鎘離子的特異性。將工程菌株暴露于不同濃度的二價鎘離子(Cd2+)環(huán)境中，在一定的時間內測定熒光強度的大小，考察工程菌株對鎘離子的敏感性，了解工程菌株對Cd2+的敏感濃度范圍及響應時間并考察工程菌株用于快速檢測重金屬鎘的可行性。 結果：從工程菌株中提取的重組質粒pPcadA-gfp通過酶切鑒定、PCR鑒定顯示啟動子已成功插入載體

3、DNA中，DNA序列分析與預期結果完全一致，說明重組體pPcadA-gfp構建成功。 工程菌株對鎘以外的11種重金屬離子(As3+、Co2+、Cu2+、Fe2+、Hg2+、Mn2+、Ni2+、Pb2+、Sb3+、Sn2+、Zn2+)基本沒有響應，僅對Cd2+產生明顯的效應，說明工程菌株對鎘離子具備較好的特異性。 使用不同濃度的鎘在誘導不同時間后觀察GFP的表達情況，發(fā)現工程菌株對Cd2+的敏感性較好，檢測范圍為1μM-5