姜葉斑病病原菌的鑒定及其對苯并咪唑類殺菌劑抗性機(jī)制的初探.pdf

1、近年來山東萊蕪姜田發(fā)現(xiàn)一種嚴(yán)重危害生姜的病害,本文對引起該病害的病原菌,進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察、致病性測定以及rDNA-ITS序列分析。研究結(jié)果表明：該病原菌菌落在PDA培養(yǎng)基上初呈白色,后期逐漸變成褐色,菌絲分枝,具隔膜,無色或淡褐色：分生孢子橢圓形、卵形,無色,單胞,兩端各含有一油球；產(chǎn)孢細(xì)胞內(nèi)壁芽生瓶梗式(eb-ph)。其rDNA-ITS序列與GenBank中的莖點(diǎn)霉(Phoma)同源性高達(dá)95.6％,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于與葉點(diǎn)霉的同源性(58.7

2、％)。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和致病性測定,鑒定該菌為姜莖點(diǎn)霉Phoma zmgiberi(Hori)X.P.Zhu & Y.L.Liu。 對姜葉斑病菌生物學(xué)特性的研究結(jié)果表明：姜葉煎汁培養(yǎng)基是該菌的最適生長培養(yǎng)基,菌絲生長最適溫度為25℃,最適pH為5,以纖維二糖為碳源的PD培養(yǎng)基和以蛋白胨為氮源的基本培養(yǎng)基最有利于菌絲的生長。孢子萌發(fā)最適溫度范圍為15～20℃,最適pH范圍為5～6,并需較高的相對濕度,以飽和濕度條件下孢子的萌發(fā)率最高

3、。 多菌靈是用于防治姜葉斑病的主要藥劑。本文對在不同地塊采集到的感病葉片進(jìn)行分離培養(yǎng),對多菌靈的敏感性測定得出2種表型：其中有62個(gè)菌株對多菌靈表現(xiàn)抗性,占測定菌株總數(shù)的31％,138個(gè)為多菌靈敏感菌株。隨機(jī)挑選4個(gè)抗性菌株和2個(gè)敏感菌株,克隆了其β-微管蛋白基因,比較敏感菌株和抗性菌株β-微管蛋白基因的序列發(fā)現(xiàn),抗性菌株198位氨基酸發(fā)生了突變,由原來的Glu(GAG)突變?yōu)锳la(GCG),其它位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)突變,說明姜葉斑病菌

4、對多菌靈的抗藥性與β-微管蛋白198位氨基酸突變有關(guān)。首次闡明了姜葉斑病菌對多菌靈的抗性機(jī)制。本文利用分子檢測技術(shù)對田間抗性菌株進(jìn)行了檢測,從而為合理用藥、及時(shí)調(diào)整抗藥性治理策略提供依據(jù)。 目前國內(nèi)外有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為,引起姜葉斑病的病原菌為姜葉點(diǎn)霉Phyllosticta zingiberi Hori。本文通過傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法和現(xiàn)代的分子生物學(xué)技術(shù)對引起姜葉斑病的病原菌的分類地位進(jìn)行了重新劃分。對其生物學(xué)特性的研究為研究該病害的