牡蠣多肽的理化性質、藥理活性測定及其口服結腸定位微丸的研究.pdf

1、牡蠣(oyster)，俗稱海蠣子，是我國四大養(yǎng)殖貝類之一，也是我國衛(wèi)生部批準的第一批藥用兼保健的功能性食品。牡蠣中蛋白質的含量較高，是制備生物活性肽的良好原料，目前對牡蠣多肽的研究雖正處于初級階段，但已顯示出了良好的發(fā)展前景。因此本文對特定產(chǎn)地的牡蠣多肽進行了分離純化，研究了其理化性質及部分藥理活性，為該類多肽的研究開發(fā)提供理論依據(jù)和技術支持。
　　 自由基是指帶有不配對電子的原子、原子團或分子。諸多醫(yī)學研究證明，適量的自由基在

2、免疫反應、細胞分化和凋亡等過程中起著重要的作用，然而過量的自由基又是導致心血管疾病、癌癥、衰老等許多疾病的原因。隨著對自由基研究的不斷深入，氧化應激損傷和抗氧化保護作用備受關注，天然生物小分子物質分子量小、易吸收、活性高等特點迅速成為研究的熱點之一?？寡趸嚯淖鳛槠渲幸活?，具有抑制生物大分子過氧化和清除體內自由基的功能，而且現(xiàn)在大部分抗氧化多肽是通過蛋白酶在溫和條件下水解蛋白質獲得，使用安全性較高。此外諸多研究證明很多海洋生物種提取的活

3、性肽具有免疫調節(jié)功能，而促脾臟淋巴細胞轉化試驗是檢測此免疫功能的體外試驗方法之一，這主要是因為脾臟是機體內最大的外周免疫器官，也是T淋巴細胞、B淋巴細胞定居和接受抗原刺激產(chǎn)生免疫應答的重要場所，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后有著密切關系。在此理論基礎之上，本文對制得的牡蠣多肽進行了體外抗氧化活性和免疫調節(jié)的研究。
　　 然而，蛋白多肽類藥物往往在上消化道被酶降解，生物利用度很低，因此大多采用注射給藥，給患者帶來了很多不便。結腸中蛋

4、白水解酶含量很低，根據(jù)這一生理特性，口服結腸定位給藥系統(tǒng)(oralcolon-specificdrugdeliverysystem，OCDDS)日益受到人們的關注。OCDDS是通過多種制劑技術使藥物口服后，在胃及小腸內不釋放，只有到達回盲部或結腸部位才定位釋放藥物的一種新型藥物控釋系統(tǒng)，其主要意義有①治療結腸局部疾病而避免藥物引起的全身性副作用，如結腸炎、結腸癌、結腸性寄生蟲病等。②利用結腸對藥物擇時吸收治療如晨僵、哮喘等時辰性疾病。③

5、利用結腸吸收避免胃腸道對多肽蛋白類藥物的破壞而提高療效。所以OCDDS不僅有重要的臨床意義，也有廣闊的市場前景。因此本文根據(jù)口服結腸定位系統(tǒng)原理，制備了該多肽的結腸定位給藥微丸，把藥物直接運送到結腸部位釋放，避免了通過上消化道被酶降解，而且多肽類藥物在小腸末端吸收很好，為該類藥物的臨床應用奠定了基礎。
　　 總之，本課題將通過酶解法從山東榮成產(chǎn)牡蠣中制得生物活性肽經(jīng)有機溶劑分級沉淀和交聯(lián)葡聚糖凝膠色譜分離純化，獲得不同分子量的活

6、性肽。在進行了檢查方法的建立及理化性質的測定基礎上，研究了不同分子量的牡蠣多肽抗氧化活性及免疫調節(jié)作用，最后對其進行了口服結腸定位制劑的研究。
　　 本研究取得的結果和結論有以下幾個方面：
　　 1.利用酶解法制得牡蠣多肽，經(jīng)有機溶劑分級沉淀和交聯(lián)葡聚糖凝膠色譜分離純化，獲得相對較純的三種牡蠣多肽A1、A2和A3。
　　 2.通過對比研究，建立有效、準確的牡蠣多肽的檢查方法。
　　 3.通過氨基酸分析，了

7、解牡蠣多肽的氨基酸組成。
　　 4.運用紅外光譜(IR)和圓二色譜(CD)預測了A1、A2和A3的二級結構。
　　 5.測定了三種牡蠣多肽部分理化性質。三種牡蠣多肽的平均分子量分別約為8.3kDa、6.5kDa和3.5kDa;等電點約為：pH6.4:蛋白含量分別為：69.633％、42.886％和81.849％;多糖含量分別為：3.52％、28.74％和2.88％。
　　 6.牡蠣多肽體外抗氧化活性研究結果表明：