應(yīng)用組織芯片檢測(cè)宮頸癌中Survivin mRNA及其蛋白與P63蛋白的表達(dá)和臨床意義.pdf

1、目的：宮頸癌(cervical carcinoma)是女性生殖道惡性腫瘤中最常見(jiàn)者之一，其發(fā)生過(guò)程要經(jīng)歷一個(gè)較長(zhǎng)的癌前病變，即宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)過(guò)程。目前已知腫瘤的發(fā)生不僅與腫瘤細(xì)胞的增殖和分化異常有關(guān)，而且與細(xì)胞凋亡基因的變化有關(guān)。增殖和凋亡之間的失衡可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)正常宮頸、CIN及宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中存活素(Survivin)、P63蛋白表達(dá)

2、的檢測(cè)，探討Survivin、P63的表達(dá)在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用；Survivin、P63的表達(dá)與宮頸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)系；觀察P63在宮頸不同病變中表達(dá)分布的差異，闡述其在宮頸上皮分化過(guò)程中的作用；Survin與P63的表達(dá)在宮頸癌組織中的相關(guān)性，為進(jìn)一步揭示宮頸癌的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。 方法： 1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)54例宮頸癌組織、153例CIN組織及

3、39例正常宮頸組織中Survivin蛋白、P63蛋白的表達(dá)。 2.應(yīng)用原位雜交技術(shù)(In Situ Hlybridization，ISH)檢測(cè)54例宮頸癌組織、153例CIN組織及39例正常宮頸組織中Survivin mRNA的表達(dá)。 3.應(yīng)用自制組織芯片技術(shù)將247例供體標(biāo)本，按陣列設(shè)計(jì)順序依次放入受體蠟塊中，融合、切片、撈片、烤片制成需要的組織芯片。結(jié)果： 1.組織芯片制備結(jié)果按課題需要制作6×5組織芯片6張

4、，5×7組織芯片2張，組織點(diǎn)陣排列整齊，無(wú)點(diǎn)陣移位現(xiàn)象，無(wú)意義位點(diǎn)51個(gè)。故標(biāo)本實(shí)際例數(shù)為宮頸癌48例，正常宮頸35例，CIN113例。組織位點(diǎn)的形態(tài)可觀測(cè)率為89.36％。 HE染色均勻，無(wú)脫片、異位和皺折。原位雜交染色及免疫組化染色，陽(yáng)性定位清楚，背景干凈。 2.Survivin在宮頸不同病變中的表達(dá)采用ISH和IHC法分別檢測(cè)Survivin mRNA和蛋白在48例宮頸癌組織、35例正常宮頸組織及113例CIN組織

5、中的表達(dá)，檢測(cè)結(jié)果顯示：無(wú)論是蛋白水平還是mRNA水平，癌組織中Survivin的表達(dá)(ISH：64.58％，IHC：87.50％)均高于正常宮頸組織(ISH：14.29％，IHC：31.43％)(P＜0.05)；Survivin蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)與CIN Ⅰ(70.37％)、CIN Ⅱ(77.14％)、CINⅢ(80.39％)中的表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。Survivin mRNA在宮頸癌組織中的表達(dá)與在CIN Ⅱ(48.

6、57％)、CINⅢ(60.78％)中的表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但與CIN Ⅰ(29.63％)中的表達(dá)差異顯著(P＜0.05)。 綜合IHC和ISH的結(jié)果，Survivin與患者年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無(wú)關(guān)(P＞0.05)。 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)與Survivin mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.529，P＜0.05)。 3.P63蛋白在宮頸不同病變中的表達(dá)采用IH

7、C法檢測(cè)48例宮頸癌組織、35例正常宮頸組織及113例CIN組織中P63蛋白的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，P63在宮頸癌組織中的強(qiáng)陽(yáng)性率為25.00％，明顯高于正常宮頸組織、CIN Ⅰ及CINⅡ中的強(qiáng)陽(yáng)性率，三者強(qiáng)陽(yáng)性率分別為O％，3.70％，8.57％(P＜0.05)；但與CINⅢ的強(qiáng)陽(yáng)性率(17.65％)無(wú)明顯差異(P＞0.05)；從CINⅠ→Ⅱ→Ⅲ，P63的表達(dá)具有顯著性差異(P＜0.05)。 P63的表達(dá)與患者年齡、腫物直徑、臨床分期及淋

8、巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P＞0.05)，與腫瘤分化程度相關(guān)(P＜0.05)。 4 P63蛋白與Survivin蛋白的關(guān)系在宮頸癌組織中P63蛋白的表達(dá)與Survivin蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(rs=0.364，P＜0.05)。 5 P63蛋白與Survivin mRNA的關(guān)系在宮頸癌組織中P63蛋白的表達(dá)與Survivin mRNA的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(rs=-0.016，P＞0.05)。 結(jié)論： 1.Survivi

9、n mRNA和蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織，因而提示Survivin可能與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。Survivin mRNA在宮頸癌與CINⅠ的表達(dá)差異顯著，提示Survivin mRNA對(duì)宮頸早期病變的檢測(cè)是有用的。Survivin mRNA及蛋白的表達(dá)與年齡、腫物分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無(wú)相關(guān)性。 2.Survivin蛋白在正常宮頸與CIN各級(jí)病變中的表達(dá)差異具有顯著性，說(shuō)明Survivin可以作為

10、宮頸癌前病變檢測(cè)指標(biāo)；Survivin蛋白在宮頸癌與CIN各級(jí)病變之間的差異不顯著，說(shuō)明Survivin蛋白可能參與宮頸的不同病變過(guò)程。Survivin蛋白在CIN不同病變中的表達(dá)無(wú)差異，但卻存在明顯的分層變化，其分布規(guī)律與CIN的變化一致，這提示Survivin能為CIN病變提供一個(gè)較直觀的依據(jù)。 3 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)與Survivin mRNA的表達(dá)關(guān)系密切，揭示Survivin蛋白的表達(dá)水平可以間接反映其mR

11、NA的表達(dá)水平，而且Survivin的高表達(dá)可能與Survivin基因轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)有關(guān)。 4 P63蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織，因而提示P63可能與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)；從CIN I→II→III，P63的表達(dá)具有顯著性差異，說(shuō)明P63與鱗狀上皮的分化程度呈反比，也提示P63對(duì)CIN的分期是有用的；P63在不同腫瘤分化的宮頸癌組織中的表達(dá)具有明顯差異，提示P63與宮頸上皮分化的程度密切相關(guān)；P63蛋白的表達(dá)與年齡

12、、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無(wú)相關(guān)性。 5 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達(dá)與P63蛋白的表達(dá)關(guān)系密切，且隨著Survivin蛋白表達(dá)強(qiáng)度的增強(qiáng)，P63也隨之增強(qiáng)，提示兩者在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能具有協(xié)同作用。但P63與Survivin mRNA的表達(dá)無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明P63與Survivin之間的協(xié)同作用是發(fā)生在蛋白水平上的。 6 組織芯片手工制做，程序簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)方便，是一種簡(jiǎn)便可行，高效穩(wěn)定的技術(shù)方法，能