逆轉(zhuǎn)錄病毒整合酶真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其與Brd2相互作用初探.pdf

1、逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組整合到宿主細(xì)胞染色體是逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的重要環(huán)節(jié),而整合的位點(diǎn)是隨機(jī)的,其機(jī)制尚不明了,病毒整合酶與宿主細(xì)胞之間的相互作用可能影響整合的過(guò)程。溴結(jié)合域蛋白2(Brd2)是一種含有多個(gè)磷酸化功能位點(diǎn)和溴區(qū)結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄核因子,是與轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀遺傳學(xué)相關(guān)的蛋白質(zhì)家族,國(guó)外有學(xué)者初步發(fā)現(xiàn)Brd2與MLV、HIV的整合酶之間可能存在相互作用,本課題構(gòu)建了綠色熒光蛋白標(biāo)記的MLV、HIV整合酶和紅色熒光蛋白標(biāo)記的Brd2的真核表達(dá)質(zhì)

2、粒,應(yīng)用激光共聚焦共定位的方法初步探討了Brd2與MLV、HIV的整合酶之間的相互作用,為揭示Brd2對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒整合位點(diǎn)的影響打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　目的:構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的MLV、HIV整合酶和紅色熒光蛋白標(biāo)記的Brd2的真核表達(dá)質(zhì)粒,應(yīng)用激光共聚焦共定位試驗(yàn)探討B(tài)rd2與MLV、HIV整合酶之間的相互作用。
　　方法:用分子克隆技術(shù)構(gòu)建綠色熒光蛋白標(biāo)記的HIV整合酶的真核表達(dá)質(zhì)粒psectag2A-GFP-hIN、ML

3、V整合酶的真核表達(dá)質(zhì)粒psectag2A-GFP-mIN和紅色熒光蛋白標(biāo)記的Brd2的真核表達(dá)質(zhì)粒pDsred2-N1-Brd2。分別將psectag2A-GFP-hIN、pDsred2-N1-Brd2和psectag2A-GFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,觀察相應(yīng)的熒光,檢測(cè)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的表達(dá),通過(guò)激光共聚焦共定位試驗(yàn)探討B(tài)rd2與HIV、MLV整合酶之間的相互作用。
　　結(jié)果:本課題構(gòu)建了psect

4、ag2A-GFP-hIN、psectag2A-GFP-mIN、pDsred2-N1-Brd2的真核表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)測(cè)序結(jié)果與預(yù)期相符,將構(gòu)建好的上述質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞,熒光檢測(cè)到了轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的表達(dá),并初步應(yīng)用激光共聚焦共定位試驗(yàn)探討了Brd2與HIV、MLV整合酶之間存在的相互作用。
　　結(jié)論:成功構(gòu)建了HIV、MLV整合酶的真核表達(dá)質(zhì)粒,并對(duì)其進(jìn)行了綠色熒光標(biāo)記,成功構(gòu)建了紅色熒光蛋白標(biāo)記的Brd2真核表達(dá)質(zhì)粒,而B(niǎo)rd2的熒