黃芩苷的生物轉(zhuǎn)化及其產(chǎn)物的抗病毒作用.pdf

1、本文利用米曲霉對黃芩苷進(jìn)行了生物轉(zhuǎn)化，使黃芩苷轉(zhuǎn)化為其苷元黃芩素，并對黃芩苷的生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基進(jìn)行了碳源與氮源的優(yōu)化，以提高黃芩苷的轉(zhuǎn)化率。同時(shí)還從轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基中對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物黃芩素進(jìn)行了提取、純化并鑒定，進(jìn)一步研究了黃芩素的抑制副溶血弧菌噬菌體與凡納濱對蝦WSSV作用。主要實(shí)驗(yàn)工作及結(jié)果如下：1、利用米曲霉的兩步活化法將黃芩苷轉(zhuǎn)化為黃芩素，并對轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了提純與鑒定。轉(zhuǎn)化條件為：液體發(fā)酵，pH6，30℃，利用綜合馬鈴薯培養(yǎng)基與玉米芯培養(yǎng)基兩

2、步發(fā)酵。所得的玉米芯發(fā)酵液加甲醇混勻后過濾，通過高效液相色譜檢測，結(jié)果表明米曲霉已經(jīng)將黃芩苷轉(zhuǎn)化為黃芩素。同時(shí)用乙醚萃取法從玉米芯發(fā)酵液中萃取到黃色固體提取物，經(jīng)過高效液相色譜與標(biāo)準(zhǔn)品對照鑒定，該提取物為黃芩素。2、通過對黃芩苷的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的碳源與氮源優(yōu)化，使黃芩苷的轉(zhuǎn)化率由1.09％提高至88.36％，并確定了黃芩苷的生物轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基的最適配方為：0.0017％精氨酸+0.0017％纈氨酸+0.0017％谷氨酸+0.0017％丙氨酸+0

3、.0017％組氨酸+0.0017％酪氨酸+0.01％尿素，0.4％KH2PO4，0.04％CACl2，0.04％MGSO4，pH6。3、利用轉(zhuǎn)化產(chǎn)物黃芩素進(jìn)行抑制副溶血弧菌噬菌體裂解作用的研究，并比較了黃芩素懸濁液與黃芩素環(huán)糊精包合物的副溶血弧菌噬菌體裂解作用的抑制效果。結(jié)果表明，黃芩素懸濁液及黃芩素環(huán)糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌體裂解作用效果的強(qiáng)弱與其濃度、作用時(shí)間呈正相關(guān)，黃芩素環(huán)糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌體裂解作用比黃芩素懸

4、濁液稍強(qiáng)。4、以凡納濱對蝦為研究對象，研究了黃芩素環(huán)糊精注射液對WSSV的抑制作用。通過死亡率以及NOS、PO、血藍(lán)蛋白、蝦青素、血細(xì)胞計(jì)數(shù)等免疫學(xué)指標(biāo)的變化來檢測黃芩素對凡納濱對蝦WSSV的抑制效果。結(jié)果表明，黃芩素使感染W(wǎng)SSV凡納濱對蝦的死亡率由100％降低至5％，并且在NOS、PO、血藍(lán)蛋白、蝦青素、血細(xì)胞數(shù)量上表現(xiàn)出一定的差異性，注射過黃芩素的藥物組與未注射過黃芩素的感染組的凡納濱對蝦不僅各免疫因子的變化趨勢不同，而且各免疫因