生物標志物p53與miRNA的表面等離子體激元共振檢測.pdf

1、表面等離子體激元共振(SPR)是一種基于物質(zhì)相互作用引起芯片表面折射率或厚度變化而進行檢測的光學技術,它是研究生物分子間相互作用的有力工具,具有實時、靈敏度高、免標記以及樣品無需純化等優(yōu)點,在蛋白及核酸等生物分子檢測方面具有廣闊的應用前景。本文利用SPR技術的優(yōu)勢對兩種生物標志物p53蛋白和miRNA進行了檢測。
　　 首先,利用雙通道SPR技術實現(xiàn)了對癌細胞溶胞液中野生型及總p53蛋白(野生型與突變型p53蛋白的總和)的高靈敏

2、檢測。將捕獲野生型p53的一致性雙鏈DNA以及特異性識別總p53蛋白的單克隆抗體分別組裝到SPR芯片的兩個通道上,通過流動注射p53蛋白的溶液,從而檢測野生型及總p53蛋白的濃度水平。由于p53蛋白和一致性雙鏈DNA以及單克隆抗體具有高度的親和性,所以可檢測極低濃度的p53蛋白水平。野生型及總p53蛋白所對應的SPR信號的差減可直接反應不同類型癌細胞中p53的突變量。同一SPR芯片上野生型與突變型p53蛋白的同時測定消除了以往不同方法、

3、不同技術檢測的不確定性。此外,該方法簡單、無需對樣品進行標記,克服了傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附分析操作步驟煩瑣、且使用酶標抗體的缺陷,為臨床上癌癥的預警及早期診斷提供了理論依據(jù)。
　　 miRNA是一組含有19～25個核苷酸的非編碼小RNA。利用SPR技術免標記、高靈敏的特點,采用類似免疫競爭的方式,即表面固定的miRNA探針與miRNA靶基因及生物素標記的miRNA(biotin-miRNA)發(fā)生競爭雜交反應,隨后流動注射納米金粒子標