PTEN在三種病理性妊娠患者胎盤(pán)組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景：
　　 氧化應(yīng)激是指活性氧(ROS)生成和抗氧化防御系統(tǒng)之間的不平衡狀態(tài)。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能紊亂在諸如缺血-再灌注損傷、高血壓、糖尿病及動(dòng)脈粥樣硬化等血管性疾病中具有重要作用。
　　 近年來(lái)病理妊娠的發(fā)病機(jī)制始終是產(chǎn)科領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，許多研究表明病理妊娠存在明顯的氧化應(yīng)激水平。子癇前期(PE)、胎兒生長(zhǎng)受限(FGR)和妊娠期糖尿病(GDM)是三種常見(jiàn)的病理性妊娠，常伴發(fā)較高的孕婦及圍產(chǎn)兒病死率，對(duì)妊娠結(jié)

2、局影響嚴(yán)重。
　　 目前子癇前期的病因?qū)W說(shuō)很多，如異常滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮肌層、免疫損傷、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、遺傳因素、營(yíng)養(yǎng)缺乏及胰島素抵抗等，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是子癇前期病理生理變化的中心環(huán)節(jié)，是各種致病因素介導(dǎo)于妊高征的共同通路，而血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。有研究證明氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)可能是子癇前期發(fā)病的主要機(jī)制之一，許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)子癇前期患者體內(nèi)氧化系統(tǒng)及抗氧化系統(tǒng)的平衡遭到了破壞，其中氧化作用增強(qiáng)，抗氧化能力相對(duì)減弱，使得

3、機(jī)體處在一種高氧化應(yīng)激狀態(tài)。FGR是一種多病因疾病，40％的患者病因不明確，其主要危險(xiǎn)因素分為母體因素、胎兒因素、胎盤(pán)因素、臍帶因素，在各項(xiàng)危險(xiǎn)因素中任一個(gè)環(huán)節(jié)異常均可導(dǎo)致FGR的發(fā)生?，F(xiàn)有大量研究表明FGR的發(fā)生與脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng)及抗氧化系統(tǒng)活性減弱有關(guān)。近期研究表明妊娠期糖尿病的發(fā)生、發(fā)展與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，妊娠期糖尿病患者的血清脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物表達(dá)水平較正常孕婦是升高的。有學(xué)者試驗(yàn)證明糖尿病患者的血漿中含有較高水平的硫巴比妥反應(yīng)物質(zhì)及

4、脂質(zhì)氫過(guò)氧化物，兩者均是脂質(zhì)過(guò)氧化的經(jīng)典標(biāo)志物，提示糖尿病與氧化應(yīng)激之間直接存在一定關(guān)系。
　　 第10號(hào)染色體缺失性磷酸酶和張力蛋白同源物基因(PTEN)是1997年發(fā)現(xiàn)的具有蛋白和脂質(zhì)磷酸酶雙重活性的抑癌基因，PTEN作為一種新型的抑癌基因，在細(xì)胞周期調(diào)控、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞黏附和遷移、抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖等多種生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。PTEN在很多正常組織中表達(dá)，在胚胎發(fā)展的早期，如胃、肝、中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)等均有PT

5、EN表達(dá)?，F(xiàn)已有大量的文獻(xiàn)證實(shí)，很多癌癥的發(fā)生與PTEN表達(dá)的缺失密切相關(guān)，推測(cè)PTEN在各組織器官的表達(dá)變化可能與在疾病中的突變有重要關(guān)系。
　　 近年來(lái)，很多研究發(fā)現(xiàn)PTEN與氧化應(yīng)激存在一定的關(guān)系。在癌癥患者體內(nèi)存在高水平的氧化應(yīng)激狀態(tài)，可能抑制了PTEN的表達(dá)，影響了細(xì)胞正常調(diào)節(jié)機(jī)制，從而導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。林艷等研究發(fā)現(xiàn)胃腺癌患者體內(nèi)存在過(guò)高的氧化應(yīng)激水平及過(guò)低的抗氧化水平，機(jī)體抗氧化能力下降有可能降低抑癌基因PTENmR

6、NA和FOXO3a mRNA的表達(dá)。PTEN屬于蛋白酪氨酸磷酸酯酶家族成員，PTEN是對(duì)氧化調(diào)控最敏感的成員之一，氧自由基H2O2對(duì)PTEN能進(jìn)行可逆性的氧化調(diào)控。H2O2可以氧化滅活PTEN，參與PTEN/PIP3/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)已在很多實(shí)驗(yàn)中證實(shí)。國(guó)外學(xué)者研究表明，H2O2能引起PTEN蛋白催化中心的124位半胱氨酸殘基發(fā)生氧化，該124位的殘基能與74位的半胱氨酸殘基形成二硫鍵，抑制PTEN磷酸酯酶活性呈時(shí)間、劑量依賴(lài)性。何建秋等

7、分別通過(guò)用不同濃度葡萄糖和H2O2干預(yù)INS細(xì)胞，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞ROS濃度隨之逐漸增高，高糖和H2O2干預(yù)INS細(xì)胞的PTEN表達(dá)明顯下降，提示葡萄糖代謝引起INS-1細(xì)胞內(nèi)的ROS升高通過(guò)抑制PTEN基因表達(dá)而參與了胰島素分泌的信號(hào)途徑。另外有國(guó)內(nèi)學(xué)者建立了體外條件敲除PTEN基因的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系模型，發(fā)現(xiàn)PTEN基因缺失后細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫酶和Mn-SOD基因轉(zhuǎn)錄水平降低，胞內(nèi)過(guò)多ROS形成氧化壓力，導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)氧化損傷，由此推測(cè)P

8、TEN可降低細(xì)胞內(nèi)基礎(chǔ)ROS水平，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御能力，在保護(hù)細(xì)胞免于氧化損傷、維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原環(huán)境有著重要作用。
　　 PTEN作為一種抑癌基因，近年來(lái)在腫瘤方面取得了很大的進(jìn)展;而關(guān)于PETN與子癇前期、妊娠期糖尿病、胎兒生長(zhǎng)受限這些疾病的相關(guān)研究相對(duì)較少;PTEN蛋白在人體很多正常組織有表達(dá)，但在胎盤(pán)組織的相關(guān)研究較少。
　　 研究表明PTEN與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，PTEN蛋白受到氧化還原調(diào)節(jié)，近期國(guó)內(nèi)學(xué)者研究

9、發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白具有抗氧化作用，而這些妊娠合并癥的發(fā)生與機(jī)體內(nèi)的氧化抗氧化失衡的狀態(tài)密切相關(guān)，這些病理妊娠體內(nèi)不同程度的氧化應(yīng)激狀態(tài)是否會(huì)影響PTEN的表達(dá)？
　　 研究目的：
　　 本研究通過(guò)運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)了子癇前期、胎兒生長(zhǎng)受限、妊娠期糖尿病及正常孕婦胎盤(pán)組織中PTEN蛋白的表達(dá)情況，分析了PTEN蛋白的表達(dá)水平與這些疾病的嚴(yán)重程度是否相關(guān)，初步探討PTEN蛋白在這些胎盤(pán)源性疾病的作用，為疾病治療提供新的思路。

10、
　　 研究方法：
　　 1.于2012年2月至2013年1月收集在我院住院分娩的子癇前期、FGR、妊娠期糖尿病患者及正常對(duì)照組的胎盤(pán)組織標(biāo)本，所取的新鮮標(biāo)本組織放至10％中性福爾馬林液中固定以備免疫組化檢測(cè)。
　　 2.運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)了子癇前期、FGR、妊娠期糖尿病及正常孕婦胎盤(pán)組織中PTEN蛋白表達(dá)水平的是否存在差異。
　　 3.采用免疫組化半定量圖像分析法檢測(cè)子癇前期組、FGR組、妊娠期糖尿

11、病及正常孕婦組胎盤(pán)中PTEN蛋白的表達(dá)水平，用Imageproplus圖像分析技術(shù)測(cè)量PTEN蛋白的平均光密度(IOD)。
　　 4.采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)資料用(x)±s形式表示，兩樣本間采用兩組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，所測(cè)PTEN因子檢測(cè)值組間比較時(shí)采用One-Way ANOVN檢驗(yàn)（LSD-t檢驗(yàn)，Dunnett's T3檢驗(yàn)）;P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.PTEN蛋

12、白在子癇前期組和正常孕婦組胎盤(pán)中的表達(dá)情況
　　 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果顯示，PTEN蛋白主要表達(dá)于胎盤(pán)組織血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核，藍(lán)色為細(xì)胞核，棕黃色或淡黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，偶見(jiàn)滋養(yǎng)細(xì)胞。與正常對(duì)照組比較，輕度子癇前期組、重度子癇前期組PTEN蛋白表達(dá)水平降低，均具有顯著性差異(P＜0.05);重度子癇前期組PTEN水平低于輕度組，具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.PTEN蛋白在子癇前期合并FGR組、單純F

13、GR組和正常孕婦組胎盤(pán)中的表達(dá)情況
　　 實(shí)驗(yàn)表明，單純FGR組與正常對(duì)照組PTEN蛋白水平比較，低于正常孕婦組，未見(jiàn)顯著性差異（P＞0.05）;子癇前期合并FGR組的PTEN水平低于單純FGR組和正常孕婦組，均具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.PTEN蛋白在GDM組和正常孕婦組胎盤(pán)中的表達(dá)情況
　　 結(jié)果顯示，PTEN蛋白表達(dá)于胎盤(pán)組織的細(xì)胞質(zhì)和胞核，可見(jiàn)深褐色或淡黃色顆粒，陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞主要為血管內(nèi)皮

14、細(xì)胞，可見(jiàn)部分合體滋養(yǎng)細(xì)胞有陽(yáng)性反應(yīng)。妊娠期糖尿病組與正常對(duì)照組PTEN水平比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.PTEN蛋白在正常對(duì)照組胎盤(pán)組織中有表達(dá)，主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞，提示PTEN可能在維持正常妊娠中起一定的作用。
　　 2.子癇前期組PTEN蛋白表達(dá)水平降低，且隨著病情加重而降低;提示PTEN可能成為評(píng)估子癇前期患者病情的一個(gè)新指標(biāo)。
　　 3.在子癇前期合并FGR