在青春期前和青春期后的小鼠卵巢發(fā)育中利用深度測(cè)序發(fā)現(xiàn)和分析miRNAs以及mir-484的功能特性.pdf

1、本研究分為二部分：
　　1、小鼠出生后卵巢不同發(fā)育時(shí)期和超數(shù)排卵期間miRNAs的鑒定
　　小的非編碼RNAs，也稱(chēng)作MicroRNAs，它們?cè)趶V泛的組織中也包括卵巢，通過(guò)序列互補(bǔ)在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因的表達(dá)調(diào)控起重要作用。這些miRNAs可能會(huì)在轉(zhuǎn)錄水平嚴(yán)格的調(diào)控卵巢發(fā)育和卵泡發(fā)育過(guò)程中的許多基因。因此，鑒定特殊組織中的miRNAs可以為進(jìn)一步了解miRNAs在不同生物學(xué)過(guò)程中的作用奠定基礎(chǔ)。為了探討miRNAs在卵巢發(fā)育和卵

2、泡發(fā)育過(guò)程中的作用，利用Illumina深度測(cè)序技術(shù)檢測(cè)了8個(gè)不同樣本的miRNAs序列庫(kù)。選擇不同發(fā)育時(shí)期的卵巢來(lái)檢測(cè)miRNAs在通過(guò)對(duì)小鼠注射或者不注射PMSG或者h(yuǎn)CG獲得的不同發(fā)育階段的性腺中的表達(dá)模式
　　從大規(guī)模的測(cè)序reads（一次測(cè)序中儀器讀取的核苷酸長(zhǎng)度）去除質(zhì)量較低的reads后挑選16-26bp的reads進(jìn)行差異表達(dá)分析和新miRNA的批注。不同發(fā)育時(shí)期卵巢中miRNAs的表達(dá)分析結(jié)果顯示一些miRNAs

3、在卵巢發(fā)育的特定時(shí)期差異表達(dá)，而另一些則普遍表達(dá)。所有的差異表達(dá)miRNAs中我們發(fā)現(xiàn)有61種miRNAs在不同發(fā)育階段卵巢表達(dá)的倍數(shù)變化在2以上。在上調(diào)的miRNAs中mmu-miR-1298的變化倍數(shù)4.025是最高的，而mmu-miR-150則下調(diào)了3倍以上。此外，利用7種不同的靶基因預(yù)測(cè)軟件(DIANA-mT, miRanda, miRDB，miRWalk，RNAhybrid，PICTAR5，TargetScan)，發(fā)現(xiàn)了20種

4、差異表達(dá)miRNAs的2659個(gè)靶基因。對(duì)這些靶基因進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)了一些卵巢特異性的基因可以是一個(gè)或者多個(gè)miRNAs的靶基因。再者，通路注釋和基因本體論表明這些miRNAs參與基本的細(xì)胞過(guò)程。
　　這些結(jié)果顯示在出生后卵巢發(fā)育和超數(shù)排卵的不同階段存在著不同的miRNAs。利用生物信息學(xué)工具可以闡明這些miRNAs在卵巢發(fā)育和超數(shù)排卵過(guò)程中在不同通路、生物學(xué)功能和細(xì)胞成分中的潛在調(diào)控作用。結(jié)果為進(jìn)一步分析miRNAs以及它們?cè)诼殉?/p>

5、發(fā)育和超數(shù)排卵中的特定作用奠定基礎(chǔ)。此外，現(xiàn)有研究也為單個(gè)miRNA在卵巢發(fā)育和雌性受精過(guò)程中的鑒定和功能驗(yàn)證提供基礎(chǔ)
　　2、小鼠顆粒細(xì)胞中microRNA-484介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄后基因的調(diào)控
　　在卵巢生長(zhǎng)和卵泡發(fā)育過(guò)程中許多卵泡會(huì)發(fā)生閉鎖，最終只有少量卵泡能夠完成排卵。研究表明卵泡閉鎖主要是由顆粒細(xì)胞凋亡引起，但是顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡的分子機(jī)制還不是很清楚。因此，為了研究顆粒細(xì)胞在轉(zhuǎn)錄后修飾的分子機(jī)制，首先利用qRT-PCR檢測(cè)了