聯(lián)合抑制COX-2與5-LOX途徑對胃癌細胞的影響及機制研究.pdf

1、目的：通過單獨及聯(lián)合應用環(huán)氧合酶-2抑制劑尼美舒利和5一脂氧合酶抑制劑AA861處理胃癌AGS細胞，探討聯(lián)合抑制COX-2和5-LOX兩條通路對胃癌AGS細胞的影響及其可能的作用機制。 方法：AGS細胞常規(guī)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞做為實驗組。以相差顯微鏡觀察藥物處理前后的細胞形態(tài)改變；用四氮唑藍(thiazolyl blue tetrazolium bromide/MTT)法檢測細胞生長增殖情況；采用脫氧核糖核酸末端轉移酶介導的d

2、UTP缺口末端標記法(TUNEL)和丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法檢測細胞凋亡率，以．DNA瓊脂糖凝膠電泳法觀察凋亡細胞DNA的改變。逆轉錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測AGS細胞的5-LOXmRNA表達水平；免疫印跡法(Western blot)檢測5-LOX及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表達水平。 結果：1、相差顯微鏡觀察，藥物處理組細胞與對照組相比，形態(tài)發(fā)生明顯改變。2、MTT法與TIJNEL染色法表明，尼美

3、舒利呈時間、劑量依賴性抑制AGS細胞增殖，尼美舒利處理組的細胞凋亡率隨著劑量的增加而升高。3、MTT(AA861組vs兩藥組，p<0.01；尼美舒利vs兩藥組，p<0.05)、TUNEL染色法(單藥組vs兩藥組，p<0.01)、AO/EB染色法(單藥組vs兩藥組，p<0.01)和DNA瓊脂糖凝膠電泳法顯示，兩藥組與單藥組比較，細胞增殖抑制，凋亡增加。4、RT-PCR和western blot法檢測5-LOXmRNA和蛋白表達實驗中，尼美

4、舒利及兩藥聯(lián)合作用均使細胞5-LOX表達上調(p<0.01)，但AA861單獨作用卻不影響5-LOX表達(p>0.05)。兩藥聯(lián)合作用48h，對AGS細胞5-LOXmRNA及蛋白表達沒有交互作用(p>0.05)。5、western blot檢測p-AKt蛋白表達的實驗中，尼美舒利組p-AKt表達升高(p<0.01)，AA861組和兩藥組的p-AKt蛋白表達均降低(p<0.05)，且兩藥組p-AKt蛋白表達量最低。兩藥聯(lián)合作用48h，對A

5、GS細胞p-AKt蛋白表達具有交互作用(p<0.01). 結論：COX-2抑制劑尼美舒利和5-LOX抑制劑AA861可抑制胃癌AGS細胞增殖，并誘導凋亡。而兩藥聯(lián)合作用COX-2與5-LOX兩條通路，能更有效地抑制AGS細胞增殖，誘導凋亡。AGS細胞中存在5-LOX及AKt的表達，在尼美舒利作用下，細胞5-LOX和p-AKt表達升高；而AA861卻不影響細胞5-LOX表達，但可降低磷酸化AKt的蛋白表達量，同時，兩藥聯(lián)合作用則促