鴨疫里默氏桿菌、大腸桿菌二聯(lián)多價(jià)蜂膠疫苗的研制及其免疫應(yīng)答反應(yīng)的動(dòng)態(tài)研究.pdf

1、鴨疫里默氏桿菌感染和大腸桿菌病在臨床上常以混合感染的形式出現(xiàn)，死亡率高，飼料轉(zhuǎn)化率低，治療代價(jià)高，給養(yǎng)鴨業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。本試驗(yàn)采用四川地區(qū)鴨疫里默氏桿菌(RA)優(yōu)勢(shì)菌株(B18、B112、B115)和禽大腸桿菌(E-Coli)常見標(biāo)準(zhǔn)血清型(O1、O2、O18、O78)成功研制了鴨疫里默氏桿菌、大腸桿菌二聯(lián)多價(jià)蜂膠滅活疫苗，通過篩選確定了該疫苗的最佳免疫劑量為疫苗中每株菌的含量達(dá)到1x109CFU/mL，0.5mL/只，4℃可保存

2、10個(gè)月以上，免疫鴨首免后7dRA和E-Coli的攻毒保護(hù)率分別為60％和50％，二免后7dRA和E-Coli的攻毒保護(hù)率分別為90％和70％。 本實(shí)驗(yàn)通過淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(MTT比色法)研究細(xì)胞免疫，間接ELISA檢測(cè)免疫鴨外周血抗體水平，從而評(píng)價(jià)RA、E-Coli二聯(lián)蜂膠疫苗在鴨體內(nèi)免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)反應(yīng)性。MTT比色法(采用含10％小牛血清和5μg/mLConA的RPMI-1640于39℃培養(yǎng)66h)結(jié)果顯示首免后3d、6d、

3、9d和13d免疫組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化效果均顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于對(duì)照組，于首免后6d達(dá)到峰值。2次免疫組高于1次免疫組，但差異不顯著(P＞0.05)；首免后20d和27d1次免疫組和2次免疫組與對(duì)照組相比均差異不顯著(P＞0.05)。由此可見，蜂膠疫苗可極顯著地增強(qiáng)免疫鴨血液中的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化效果，但這種增強(qiáng)作用是短暫的，維持時(shí)間不到3周。 抗體水平檢測(cè)于首免后3d、6d、9d、13d、20d、27d、34

4、d、41d、48d、55d和69d進(jìn)行。用單株菌的超聲波裂解抗原包被酶標(biāo)板測(cè)定其在免疫鴨體內(nèi)抗體水平的動(dòng)態(tài)反應(yīng)性，結(jié)果顯示雛鴨免疫后3d即可產(chǎn)生免疫力，RA和E-Coli共7株菌的抗體水平均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，2次免疫組的抗體水平從第13d開始顯著(P＜0.05)高于1次免疫組，并在20d左右達(dá)到峰值，這種高抗體水平維持至免疫后第48d，之后逐漸下降，1次免疫組和2次免疫組第69d的抗體水平均高于同組免疫后第13d的抗體水平。本試驗(yàn)