膽囊癌組織中基因組總甲基化、Bcl-2和P53基因甲基化狀態(tài).pdf

1、目的:
　　膽囊癌是一種相對少見的惡性腫瘤,其發(fā)病率與環(huán)境因素和遺傳因素均相關(guān)。膽囊癌惡性程度較高,預(yù)后較差,一般發(fā)現(xiàn)時(shí)患者已處于膽囊癌進(jìn)展期。目前大多數(shù)研究的焦點(diǎn)是原癌基因(K-ras)和腫瘤抑制基因TSGs(Tumor Suppress Genes)如(TP53, P16,INK4A,和FHIT基因)。通過全基因組掃描和基因組等位基因分析發(fā)現(xiàn)在膽囊中多個(gè)等位基因位點(diǎn)缺失和突變,提示TSGs參與GBC的病理生理過程。近來,通過對

2、10個(gè)膽囊癌標(biāo)本的全基因組芯片掃描22,000個(gè)轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)一系列在以前未發(fā)現(xiàn)的TSGs。近年來,有關(guān) DNA甲基化在腫瘤發(fā)病中的作用進(jìn)行了大量研究,通過DNA甲基化導(dǎo)致TSGs表達(dá)抑制是腫瘤發(fā)生的主要機(jī)制之一。不同類型的腫瘤的其DNA甲基化改變具有一定的特異性。在許多病例中,異常的DNA甲基化與基因表達(dá)下降相關(guān)。DNA通過甲基化是基因缺失和基因突變之后又一表達(dá)抑制機(jī)制之一。通過數(shù)個(gè)臨床研究發(fā)現(xiàn),DNA甲基化在腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防、預(yù)

3、后評估和腫瘤腫瘤治療中具有重要作用。目前普遍認(rèn)為膽囊癌與慢性膽囊炎相關(guān),在所有的膽囊癌標(biāo)本中均可見到炎癥反應(yīng)。目前有關(guān)膽囊癌發(fā)生的分子機(jī)制還不清楚,有關(guān)DNA甲基化修飾在膽囊癌發(fā)生中的機(jī)制還不清楚。探討膽囊癌和膽囊炎患者之間基因組總甲基化水平、Bcl-2和p53基因的甲基化水平差異。
　　方法:
　　通過回顧性性分析收集在內(nèi)蒙古自治區(qū)醫(yī)院就診的45例膽囊癌組織標(biāo)本和40例膽囊炎組織病理學(xué)標(biāo)本。進(jìn)行患者基線資料采集,其中包括患

4、者性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤TNM分期、腫瘤標(biāo)志物、腫瘤病理類型和手術(shù)方式等情況,提取組織中 DNA和 RNA,通過改進(jìn)的酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測45例膽囊癌組織和40例膽囊炎組織基因組總甲基化水平,應(yīng)用甲基化異性PCR技術(shù)檢測其 Bcl-2和p53基因甲基化水平,通過熒光定量PCR檢測標(biāo)本中P53和Bcl-2基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　膽囊癌組織基因組總甲基化水平(4.87±1.1％)低于膽囊炎組織基因組總甲基化水平(6.2

5、78±0.91%),p<0.05;Bcl-2基因,45例GBC組織中,有8例發(fā)生甲基化(17.7%),40例CC組織中6例發(fā)生甲基化(17%),兩者之間無明顯差異(p>0.05)。p53基因,45例 GBC組織中29例發(fā)生甲基化(64%),40例CC組織7例發(fā)生甲基化(17.5%),兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　GBC組織Bcl-2基因mRNA表達(dá)水平為0.66±0.16,CC組織Bcl-2基因mRNA表達(dá)水平為

6、0.33±0.14,兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。GBC組織p53基因 mRNA表達(dá)水平為0.55±0.17,CC組織p53基因mRNA表達(dá)水平為0.90±0.10,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　本研究發(fā)現(xiàn),GBC發(fā)生過程中,與CC相比,基因組總甲基化水平降低,Bcl-2基因甲基化狀態(tài)無明顯變化,而P53基因甲基化水平升高。基因組低甲基化和 p53高甲基化可能是膽囊癌發(fā)生的分子機(jī)制之一?？傊?/p>