CitERF13與CitVHA-C4協(xié)同調(diào)控柑橘果實(shí)檸檬酸代謝研究.pdf

1、有機(jī)酸是果實(shí)風(fēng)味品質(zhì)重要組成之一，柑橘果實(shí)的有機(jī)酸主要為檸檬酸。本文以普通椪柑和早熟椪柑果實(shí)(C.reticulata Blanco cv.Ponkan)為材料，分析了質(zhì)子泵(V-ATPase)在柑橘果實(shí)檸檬酸代謝中的功能，獲得了檸檬酸代謝相關(guān)的V-ATPase不同亞基編碼基因。研究發(fā)現(xiàn)了轉(zhuǎn)錄因子CitERF13通過(guò)與質(zhì)子泵CitVHA-c4發(fā)生蛋白互作，參與了檸檬酸積累。主要結(jié)果如下:
　　1.利用柑橘基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，分離得到了1

2、8個(gè)V-ATPase編碼基因（命名為CitVHA），其中CitVHA-A2、GtVHA-F1、CitVHA-F2、CitVHA-G1、CitVHA-a1與CitVHA-c4的表達(dá)模式與椪柑果實(shí)發(fā)育過(guò)程檸檬酸積累呈正相關(guān)關(guān)系;利用高橙（高酸）和溫州蜜柑（低酸）果實(shí)，進(jìn)一步驗(yàn)證了CitVHA-F1、CitVHA-F2和CitVHA-c4與檸檬酸積累的相關(guān)性;相反，CitVHA-E1、CitVHA-c2、CitVHA-c3、CitVHA-c”

3、、CitVHA-d和CitVHA-e可能與椪柑果實(shí)發(fā)育過(guò)程檸檬酸降解有關(guān)，利用熱處理?xiàng)崭坦麑?shí)促使降酸，驗(yàn)證了CitVHA-E1、CitVHA-c2、CitVHA-d和CitVHA-e與檸檬酸降解相關(guān)。
　　2.利用酵母篩庫(kù)發(fā)現(xiàn)，CitVHA-c4可與CitERF13發(fā)生蛋白互作，并在雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證。且分析發(fā)現(xiàn)CitERF13與CitVHA-c4在不同柑橘材料具有協(xié)同表達(dá)模式，與高酸性狀相關(guān)。
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4、.利用煙草瞬時(shí)表達(dá)體系以及擬南芥突變體，進(jìn)一步研究了CitERF13與CitVHA-c4在檸檬酸積累過(guò)程中的功能。分別過(guò)表達(dá)CitERF13與CitVHA-c4的煙草葉片中，均伴隨有檸檬酸含量的顯著上升;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，共表達(dá)CitERF13與CitVHA-c4可進(jìn)一步提高檸檬酸含量;但在擬南芥AtVHA-c突變體中過(guò)表達(dá)CitERF13卻并不能誘導(dǎo)檸檬酸積累。這些結(jié)果表明，CitERF13和CitVHA-c4均可有效誘導(dǎo)有機(jī)酸積累，且