羊膜淚道修復(fù)支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響.pdf

1、目的:
　　觀察羊膜淚道修復(fù)支架對兔淚小管損傷后愈合過程的影響,以及通過檢測炎癥細胞、CD31、a-SMA及Muc5AC在兔淚小管組織中的表達變化情況,并與傳統(tǒng)硅膠淚道支架對比,為羊膜淚道修復(fù)支架在淚道阻塞性疾病尤其是淚小管阻塞疾病的臨床應(yīng)用提供實驗理論依據(jù)。
　　方法:
　　選取成年健康新西蘭兔30只,雌雄兼用,重1.8-2.0kg,無結(jié)膜炎、淚囊炎、眼瞼異常、眼球異常等眼部疾患及頭面部異常,淚小點位置正常,淚道沖洗

2、通暢。應(yīng)用硬化劑(葡萄糖磷霉素鈉混合溶液)注入兔淚小管,其中3只作為空白組,剩余27只建立兔淚小管損傷模型,然后隨機分為三組,羊膜組和硅膠組分別進行羊膜淚道修復(fù)支架、淚道硅膠支架植入術(shù),造模組造模后不做任何處理。分別于術(shù)后第1、2、4w三個不同時間點處死三組實驗動物,每組每次取材3只,解剖分離兔雙側(cè)淚小管,冰凍保存切片,并行常規(guī)HE染色觀察兔淚小管組織的炎性反應(yīng)程度以及粘膜上皮細胞修復(fù)情況,用免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色檢測兔淚小管組

3、織中的CD31和a-SMA的含量,間接反映淚小管組織的纖維化程度及炎性血管增生狀態(tài),同時檢測兔淚小管組織中Muc5AC粘蛋白表達情況,分析淚小管粘膜的組織學(xué)特點。
　　結(jié)果:
　　1、應(yīng)用磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管損傷模型:HE染色結(jié)果顯示,正常兔淚小管粘膜表現(xiàn)為管壁光滑,上皮層為復(fù)層柱狀上皮,排列整齊,上皮下基質(zhì)層結(jié)構(gòu)疏松,可見少量正常血管,無炎性細胞浸潤,而造模后淚小管上皮層數(shù)明顯減少、變薄,上皮層結(jié)

4、構(gòu)紊亂及出現(xiàn)缺損區(qū),炎性細胞大量浸潤,免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色結(jié)果顯示,a-SMA及CD31表達明顯上調(diào)。2、造模后三組兔淚小管組織均可見上皮層細胞數(shù)量減少,結(jié)構(gòu)紊亂,炎癥細胞浸潤,但羊膜組各觀察時間點,炎癥細胞數(shù)量明顯少于造模組及硅膠組,羊膜組術(shù)后第28天,淚小管上皮層數(shù)及結(jié)構(gòu)與正常淚道上皮相當。3、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在正常兔淚小管組織中 CD31表達陽性,而a-SMA表達陰性,造模后三組各時間點兔淚小管組織中CD31與

5、a-SMA的表達逐漸增加,因處理方法不同,兩者在兔淚小管組織中的表達量發(fā)生變化。羊膜組和硅膠組中a-SMA和CD31的表達量少于造模組,羊膜組的表達又少于硅膠組。4、免疫熒光染色結(jié)果顯示,兔淚小管組織中粘蛋白 Muc5AC表達陰性,即兔淚小管上皮中缺乏杯狀細胞。
　　結(jié)論:
　　磷霉素鈉葡萄糖混合液硬化劑能夠成功制作兔淚小管的損傷模型;羊膜作為淚道生物性的修復(fù)支架材料,使受損兔淚小管的基質(zhì)纖維化水平明顯被抑制,同時具有減輕炎