α-內(nèi)收蛋白基因Gly460Trp多態(tài)性對原發(fā)性高血壓的影響.pdf

1、目的：原發(fā)性高血壓是一種遺傳因素和環(huán)境因素共同引起的多基因遺傳病，具有種族差異、外顯遲滯和異質(zhì)性等特征。內(nèi)收蛋白是由α、β、γ3種亞單位構(gòu)成的異源二聚體或異源四聚體，它的異型分子在紅細胞、腦、肺、腎、肝臟等組織中均已檢出。內(nèi)收蛋白三個亞單位結(jié)構(gòu)相近均可分為氨基端球形頭部，頸部和羧基端尾部。其中α-內(nèi)收蛋白受Ca2+/鈣調(diào)蛋白、蛋白激酶C和蛋白激酶A的調(diào)節(jié)，參與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。此外，α-內(nèi)收蛋白還與膜骨架的其他成分(如spectrin和ac

2、tin等)及多種膜蛋白(如離子通道、交換體和離子泵等)相互作用，參與細胞膜離子轉(zhuǎn)運，尤其與多種細胞膜Na+轉(zhuǎn)運、Na+-H+交換、Na+-K+-Cl-協(xié)同轉(zhuǎn)運系統(tǒng)、Na+-Li+反轉(zhuǎn)運及鈉泵活性密切相關(guān)，進而影響血壓。人類α-內(nèi)收蛋白定位于4號染色體(4p16.3)，第10個外顯子存在G614T單核苷酸多態(tài)性，導(dǎo)致編碼該蛋白的460位甘氨酸(Gly)被色氨酸(Trp)替換。本實驗以我國北方漢族人群為研究對象，采用PCR-RFLP和DNA

3、序列測定等方法，對α-內(nèi)收蛋白基因第10外顯子部分DNA序列進行分析，進一步明確我國北方漢族人α-內(nèi)收蛋白基因Gly460Trp多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)系。 方法：以160例北方漢族原發(fā)性高血壓患者和1 51例血壓正常者為研究對象，血壓測量采用校正的汞柱式血壓計，測量上臂血壓，患者測血壓前15分鐘不吸煙，背靠靜坐5分鐘；入選前測量非同日3次血壓，取平均值；血壓測量在標準狀態(tài)下進行，即每天同一時間、同側(cè)臂、用相同血壓計、由同一測量

4、人完成。入選標準為2005年我國高血壓防治指南：有明確原發(fā)性高血壓病史并且已服用抗高血壓藥物治療者；未服用抗高血壓藥物，且非同日2次測得收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg，排除繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、高脂血癥、嚴重肝腎功能障礙者。其入選者為滿足上述原發(fā)性高血壓入選標準，且無高血壓家族史，排除繼發(fā)性高血壓、糖尿病、冠心病、高脂血癥、嚴重肝腎功能障礙者，入選的各個研究對象之間無親緣關(guān)系。登記每個研究對象的一般臨床資料并檢

5、測相關(guān)生化指標，包括：性別、年齡、家族史、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。所有研究對象需空腹12小時以上，于清晨取坐位采血，采集肘正中靜脈血。各血樣按相應(yīng)生化指標檢測要求做預(yù)處理：離心、分離上清，置于-80℃超低溫冰箱保存等，待標本收集完成后同批測定，以減小批間誤差。用含有抗凝劑的真空抽血管另外抽2ml靜脈血，充分混勻后置于-80

6、℃超低溫冰箱保存，用于基因組DNA的提取。 采用傳統(tǒng)的酚/氯仿抽提法，從外周血白細胞中提取基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)方法檢測α-內(nèi)收蛋白第10外顯子基因G614T(G為鳥嘌呤，T為胸腺嘧啶)的基因多態(tài)性，試劑主要有：磷酸緩沖溶液(PBS)、蛋白酶K(Pro Nalse K)、抽提Buffer、Tris飽和酚、氯仿、異戊醇、無水乙醇等。其他實驗試劑和儀器有：聚合酶鏈反應(yīng)引物(上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)、

7、dNTPs(北京賽百盛基因技術(shù)有限公司)、DNA marker、RedTaq DNA聚合酶(北京賽百盛基因技術(shù)有限公司)、12％聚丙烯酰胺膠(PAG)、限制性內(nèi)切酶(北京紐英倫生物技術(shù)有限公司)、英國HybaidExpress全自動擴增儀、美國Kodak凝膠成像系統(tǒng)。所有數(shù)據(jù)采用SAS 6.12統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。基因頻率采用基因計數(shù)法，等位基因頻率比例采用卡方檢驗，計量資料均以均數(shù)士標準差表示，計數(shù)資料以頻數(shù)表示。Hardy-Wei

8、nberg平衡檢驗、組間基因型及等位基因頻率的比較用四格表x2檢驗；不同基因型的血壓及指標差異采用兩獨立樣本的t檢驗。P＜0.05認為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：1.一般臨床資料及生化指標比較：兩組間在平均年齡、TC、LDL-C、HDL-C、TG方面無顯著差異(P＞0.05)：原發(fā)性高血壓組與正常對照組相比SBP、DBP水平均高于后者有顯著性差異(P＜0.05)，因此具有可比性。 2.經(jīng)卡方檢驗各組基因型分布均符合Hardy-

9、Weinberg遺傳平衡定律，說明該研究人群具有代表性。 3.α-內(nèi)收蛋白基因Gly460Trp多態(tài)性在EH組與對照組中，三種基因型構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；等位基因頻率差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 4.GlyTrp和TrpTrp基因型者收縮壓水平高于GlyGly基因型患者(P＜0.05)；GlyTrp基因型患者舒張壓水平高于GlyGly和TrpTrp基因型者(P＜0.05)。 結(jié)論：我國北